CYP2D6-polymorfismi yleislääkäripotilailla Itävallassa
CYP2D6-polymorfismi, joka määrittää UM-, IM-, NM- ja PM-tilan valitsemattomilla lääketieteellisesti hoidetuilla yleislääkäripotilailla Itävallassa
CYP 2D6 -entsyymi metaboloi huomattavan määrän lääkkeitä, joita usein määrätään yleislääketieteessä/perhelääketieteessä. Useat geneettisesti erilaiset muunnelmat määrittelevät, onko potilas ultranopea (UM), normaali (NM) (normaali tapaus), keskitaso (IM) vai huono metaboloija (PM). On arvioitu, että noin 20–25 % usein kuvatuista lääkkeistä aktivoituu aktiivisemmiksi tai metaboloituu tehottomiksi tai vähemmän tehokkaiksi lääkkeiksi CYP 2D6:n vaikutuksesta. CYP 2D6:n substraatit ovat pääasiassa masennuslääkkeitä, neuroleptejä, opioideja (esim. kodeiini), beetasalpaajat, rytmihäiriölääkkeet ja monet muut yksittäiset lääkkeet. UM:n tapauksessa lääke voi metaboloitua liian nopeasti menettäen terapeuttisen vaikutuksensa, jolloin tarvitaan suurempi annos, tai sillä voi olla toksinen vaikutus, jos se muuttuu liian nopeasti tehokkaaseen muotoon (esim. kodeiini). Jos metaboloituu liian hitaasti (PM), se voi kertyä ja saavuttaa myrkyllisiä tasoja.
Tässä havainnointitutkimuksessa (1) kerätään tiedot yksittäisen itävaltalaisen yleislääkärin potilaiden lukumäärästä, jotka saavat yhtä tai useampaa CYP 2D6:n kautta metaboloituvaa lääkettä, poimimalla heidän sähköiset tiedot viimeisten kolmen vuoden ajalta. Lisäksi (2) peräkkäisiltä potilailta, joilla on tuntematon CYP 2D6 -entsyyminsä geneettinen tila ja jotka vierailevat leikkauksessa rutiininomaisessa verikokeessa eri syistä johtuen, testataan lisäksi CYP 2D6 -metaboliatilanne, jos he todella käyttävät CYP 2D6:n kautta metaboloituvaa lääkettä.
Tutkimuksen tavoitteena on tuottaa ensimmäistä kertaa keskimääräisen itävaltalaisen yleislääkärin valkoihoisista potilaista CYP 2D6 -polymorfismidataa, mikä mahdollistaa potilaiden ryhmittelemisen NM-, UM-, IM- ja PM-statuksensa mukaan. Tällä voi olla huomattavaa kliinistä merkitystä määrättäessä tiettyjä lääkkeitä. Tässä tutkimuksessa pyritään selvittämään, kuinka monella potilaalla tietämys CYP 2D6:n metaboliasta voisi olla vaikutusta todellisuudessa määrätyn lääkkeen valintaan. Lisäksi aiomme kuvata toistuvien ja asiaankuuluvien CYP 2D6 -alleelien jakauman, mukaan lukien niiden yhdistelmät, potilailla, joilla on keskiverto itävaltalainen yleislääkäri vertailusyistä muihin valkoihoisiin populaatioihin.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Yksityiskohtainen kuvaus
Tutkimuspopulaatio:
Valitut peräkkäiset lääkäriaseman potilaat, jotka vierailevat leikkauspaikalla rutiininomaisessa verinäytteenotossa eri sairauksien vuoksi ja joille on määrätty tai on määrätty CYP2D6-entsyymin metaboloimia lääkkeitä (tai lääkkeitä, jotka ovat voimakkaita CYP 2D6:n estoaineita) viimeisen 3 vuoden aikana . Vain näillä potilailla CYP2D6-polymorfismi määritetään käyttämällä osaa EDTA-verinäytteestä. Muita geneettisiä tutkimuksia tai lisäverenottoa ei tehdä.
Potilaiden, joiden katsotaan olevan kelvollisia osallistumaan tutkimukseen, on allekirjoitettava tietoinen suostumus saatuaan tiedon tutkimuksen tavoitteista.
Verinäytteenotto ja näytteiden käsittely:
Suoritetaan standardisoitu verinäytteenotto Vacutainer-järjestelmällä ja täytetään EDTA-putki (4 ml) punaisen ja valkoisen verenkuvaa varten. 300 mikrolitraa kerätystä verestä käytetään CYP2D6-polymorfismin lisämäärityksessä.
DNA:n eristäminen:
DNA uutetaan EDTA-verestä käytännön laboratoriossa käyttämällä Spin Micro Extraction Kit® (ViennaLab, Wien) avulla. DNA:n pitoisuus ja laatu mitataan Bio Photometer plus -laitteella (Eppendorf). Uutettua DNA:ta säilytetään -81 °C:ssa erittäin matalan lämpötilan pakastimessa (U101-86, New Brunswick Scientific Co., Inc) ilman muita lisäaineita.
Reaaliaikainen PCR CYP2D6-geenin kopioluvun määrittämiseksi:
CYP2D6-geenin kopiomäärän määrittämiseksi suoritetaan käytännön laboratoriossa reaaliaikainen PCR kolmena rinnakkaisena ABI StepOnePlus -laitteella käyttämällä CYP2D6 RealFast™ CNV -määritystä (ViennaLab).
Testi perustuu fluorogeeniseen 5'-nukleaasianalyysiin, joka tunnetaan myös nimellä TaqMan®-määritys. Jokainen reaktio sisältää geenispesifisiä alukepareja CYP2D6:n ja endogeenisen kontrollin (EC) geenifragmenttien monistamiseksi, kummassakin 141 emäsparia. Muita komponentteja ovat kaksi kaksoisleimattua, geenispesifistä hydrolyysikoetinta, FAM-leimattu CYP2D6-koetin ja HEX-leimattu EC-koetin, jotka hybridisoituvat monistettujen fragmenttien sisäiseen sekvenssiin. 5'-fluoresoivan reportteri- ja 3'-sammuttajavärin läheisyys koskemattomissa koettimissa estää reportteria fluoresoimasta. PCR:n pidennysvaiheen aikana Taq-DNA-polymeraasin 5'-3'-eksonukleaasiaktiivisuus katkaisee 5'-fluoresoivan reportterin hybridisoidusta koettimesta. Fluoroforin fyysinen erottaminen sammutusväristä tuottaa fluoresoivan signaalin reaaliajassa, joka on verrannollinen kertyneeseen PCR-tuotteeseen. CYP2D6 RealFast™ CNV Assay on suhteellinen kvantitaatiomääritys, joka vertaa molempien nukleiinihappokohteiden (CYP2D6 ja EC) määrää CYP2D6 CNV -kalibraattoriin. EC-geeniä käytetään normalisoimaan fluoresenssisignaaleja eri näytteiden välillä ja se toimii PCR-positiivisena kontrollina.
Tietojen normalisoimiseksi lisää ROX-väriainetta lopulliseen pitoisuuteen 1 mikrolitra 2 x Probe Mix -seokseen.
RT- PCR:n sykliolosuhteet ABI StepOneplus-syklilaitteessa: Ensimmäinen denaturaatio: 95°C 10 min 1 sykli; denaturointi 95 °C 15 s 40 sykliä; hehkutus/pidennys 60°C 1 min.
PCR ja hybridisaatio CYP2D6-alleelimääritykseen PGX-CYP2D StripAssay™:lla:
Tätä määritystä käytetään näytteiden alajoukolle tässä tutkimuksessa, ja se kattaa vain 3 polymorfista lokusta: 1795delT (2D6*6), 1934G>A (2D6*4) ja 2637delA (2D6*3). Testiperiaate ja -menettely ovat samanlaiset kuin PGX-CYP2D6 XL StripAssay®, kuten alla on kuvattu, mutta käyttämällä erilaisia sykliolosuhteita Palm-Cyclerille (Corbett Life Science): pre-PCR: 94 °C/2 min; lämpökierto: 94°C/15 sek.- 58 °C / 30 s - 72 °C / 30 s (35 sykliä); lopullinen pidentyminen: 72°C/3 min.
PCR ja hybridisaatio CYP2D6-alleelimääritykseen PGX-CYP2D6 XL StripAssay®:lla:
19 kliinisesti merkityksellisen CYP2D6-alleelin määrittämiseen (*1; *2 A, *2 B-M; *3, *4A-H, K, L tai P, *4J tai N, *4M; *5; *6 A, B tai D, *6C; *7, *8; *9, *10A tai B, *10 C tai D; *11; *12; *14; *15; *17; *29; *35; * 39; *40 tai *58; *41) suoritetaan ensin PCR-monistus Palm-Cycler-laitteella (Corbett Life Science, Eight Mile Plains, QLD 4113, Australia) käyttämällä biotinyloituja alukkeita. Amplifikaatiotuotteet hybridisoidaan edelleen testiliuskaan, joka sisältää alleelispesifisiä oligonukleotidikoettimia, jotka on immobilisoitu joukkona rinnakkaisia linjoja. Sitoutuneet biotinyloidut sekvenssit havaitaan käyttämällä streptavidiini-alkalista fosfataasia ja värisubstraatteja. Tämän reaktion arviointi suoritetaan manuaalisesti käyttämällä StripAssay®-Evaluator -ohjelmaa (ViennaLab, Wien), patentoitua PC-ohjelmaa homotsygoottisen tai heterotsygoottisen genotyypin määrittämiseksi.
Pyöräilyolosuhteet Palm-Cyclerille (Corbett Life Science): pre-PCR: 95 °C/4 min; lämpökierto: 95°C/25 sek.- 60 °C/ 45 s - 72 °C/1 min (36 sykliä); lopullinen pidentyminen: 72°C/3 min.
Tilastot:
Tiedot tallennettiin ja analysoitiin käyttämällä Microsoft Excel -versiota 10 ja R Language and Environment for Statistical Computing and Graphics -ohjelmaa, versiota 2.9. Tietojen kuvaamiseen käytetään vakiomenetelmiä (kategorisille tiedoille frekvenssit ja prosenttiosuudet, jatkuvan datan keskiarvo ja keskihajonta). Spearmanin rankkorrelaatiokerroin lasketaan, jotta voidaan verrata yksittäisellä vastaanotolla määrättyjen CYP2D6-spesifisten lääkkeiden esiintymistiheyksiä vastaavien reseptien kokonaismäärään Ala-Itävallassa. Ryhmien väliset erot laskettiin pari-t-testillä. P-arvon < 0,05 katsottiin osoittavan tilastollista merkitsevyyttä.
Hardy-Weinberg-tasapaino laskettiin Fisherin Exact Chi-Square -testillä genotyyppien pienen määrän vuoksi.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Todellinen)
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
Lower Austria
-
Angern, Lower Austria, Itävalta, A 2261
- Practice Office
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- Potilaat, joilla on kliinisesti diagnosoitu verenpainetauti, diabetes, krooninen sydämen vajaatoiminta, hyperlipidemiat, masennus, skitsofrenia, sydämen rytmihäiriöt, kilpirauhasen sairaudet ja dementia
Poissulkemiskriteerit:
- akuutit tartuntataudit
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Havaintomallit: Muut
- Aikanäkymät: Muut
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Metabolisaattorin tilan (PM, IM, NM, UM) esiintymistiheys potilaissa
Aikaikkuna: 1 vuosi
|
Huomautus: jokaisella osallistujalla on a) kaksi yksittäistä CYP2D6-alleelia, b) näiden kahden alleelin yhdistelmästä johdetaan yksi yksilöllinen genotyyppi ja c) tästä genotyypistä johdetaan geneettisesti määritetty metaboloijastatus (PM, IM, NM, UM). Potilasta voidaan pitää tietyn lääkkeen ultranopeana (UM), normaalina (NM), väliaineena (IM) tai huonona metaboloijana (PM). |
1 vuosi
|
|
CYP2D6-alleelien esiintymistiheys potilailla
Aikaikkuna: 1 vuosi
|
19 eri CYP2D6-alleelin esiintymistiheys 287 potilaalla määritetään. Kahdella 289 potilaasta määritys ei ollut mahdollista teknisten ongelmien vuoksi. Huomautus: jokaisella osallistujalla on a) kaksi yksittäistä CYP2D6-alleelia, b) näiden kahden alleelin yhdistelmästä johdetaan yksi yksilöllinen genotyyppi ja c) tästä genotyypistä johdetaan geneettisesti määritetty metaboloijastatus (PM, IM, NM, UM). |
1 vuosi
|
|
CYP2D6-genotyyppien esiintymistiheys potilailla
Aikaikkuna: 1 vuosi
|
61 eri CYP2D6-genotyypin esiintymistiheys 287 potilaalla määritetään. Kahdella 289 potilaasta määritys ei ollut mahdollista teknisten ongelmien vuoksi. Huomautus: jokaisella osallistujalla on a) kaksi yksittäistä CYP2D6-alleelia, b) näiden kahden alleelin yhdistelmästä johdetaan yksi yksilöllinen genotyyppi ja c) tästä genotyypistä johdetaan geneettisesti määritetty metaboloijastatus (PM, IM, NM, UM). |
1 vuosi
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Niiden osallistujien määrä, joissa perhelääkäri piti aiempaa tietämystä metaboloijastatuksensa tärkeänä ennen CYP2D6-spesifisen lääkkeen määräämistä.
Aikaikkuna: 1 vuosi
|
Kuinka monelle potilaalle perhelääkärin tietämys CYP 2D6:n metaboloijasta (ultranopea (UM), normaali (NM), keskitaso (IM) ja heikko (PM)) on ollut tärkeää ennen CYP2D6-spesifisen lääkkeen määräämistä.
Huomautus: Kyseinen lääke on jo määrätty ennen analyysiä.
|
1 vuosi
|
|
Niiden potilaiden määrä koko vastaanottoväestöstä, joiden sähköiset terveystiedot (EHR) arvioitiin.
Aikaikkuna: 1 vuosi
|
Niiden osallistujien määrä, jotka ovat saaneet CYP 2D6:n kautta metaboloituvia lääkkeitä viimeisen kolmen vuoden aikana.
Nämä tiedot on poimittu lääkäriaseman sähköisistä terveyskertomuksista (EHR).
Tätä tietojen poimimista varten tutkimukseen ilmoittautuminen ja tietoisen suostumuksen allekirjoittaminen ei ollut tarpeen.
Ei muita tietoja (esim.
lähtötilanteen arvioinnit, muut tulosmittaukset ja haittatapahtumat) kerättiin tässä ryhmässä.
|
1 vuosi
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Tutkijat
- Päätutkija: Gustav Kamenski, Karl Landsteiner Institute for Systematics in General Medicine
Julkaisuja ja hyödyllisiä linkkejä
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Opintojen valmistuminen (Todellinen)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muut tutkimustunnusnumerot
- KarlLandsteinerISGM CYP2D6
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
IPD-suunnitelman kuvaus
IPD-jaon aikakehys
IPD-jaon käyttöoikeuskriteerit
IPD-jakamista tukeva tietotyyppi
- Tutkimuspöytäkirja
- Tilastollinen analyysisuunnitelma (SAP)
- Ilmoitettu suostumuslomake (ICF)
- Kliinisen tutkimuksen raportti (CSR)
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .