CYP2D6 polimorfizmus általános orvosi betegeknél Ausztriában
CYP2D6 polimorfizmus, amely meghatározza az UM, IM, NM és PM státuszt a nem válogatott, orvosilag kezelt általános praxisú betegeknél Ausztriában
A CYP 2D6 enzim jelentős számú, az általános gyakorlatban/családgyógyászatban gyakran felírt gyógyszert metabolizál. Különféle genetikailag eltérő változatok határozzák meg, hogy a páciens ultragyors (UM), normál (NM) (normál eset), közepes (IM) vagy gyenge metabolizáló (PM). Becslések szerint a gyakran leírt gyógyszerek körülbelül 20-25%-a aktiválódik aktívabbá vagy metabolizálódik hatástalan vagy kevésbé hatékony gyógyszerekké a CYP 2D6 hatására. A CYP 2D6 szubsztrátumai főleg antidepresszánsok, neuroleptikumok, opioidok (pl. kodein), béta-blokkolók, antiaritmiás szerek és számos egyéb egyedi gyógyszer. UM esetén egy gyógyszer túl gyorsan metabolizálódhat, elveszítve terápiás hatását, nagyobb dózist igényel, vagy toxikus hatású lehet, ha túl gyorsan alakul át hatékony formában (pl. kodein). Ha túl lassan metabolizálódik (PM), felhalmozódhat és mérgező szintet érhet el.
Ebben a megfigyeléses vizsgálatban (1) egyetlen osztrák háziorvosi rendelő azon pácienseinek számáról gyűjtöttek adatokat, akik egy vagy több, CYP 2D6 által metabolizált gyógyszert kaptak az elmúlt 3 év elektronikus nyilvántartásaiból. Ezen túlmenően (2) egymást követő betegeknél, akiknél a CYP 2D6 enzim genetikai státusza ismeretlen, és akik különböző okok miatt rutin vérvizsgálatra látogatnak el a rendelőbe, további CYP 2D6 metabolizáló státuszukat is megvizsgálják, ha ténylegesen CYP 2D6 által metabolizált gyógyszert szednek.
A vizsgálat célja egy átlagos osztrák háziorvosi praxis kaukázusi betegeiből első alkalommal előállítani CYP 2D6 polimorfizmus adatait, amely lehetővé teszi a betegek csoportosítását NM, UM, IM és PM állapotuk szerint. Ennek jelentős klinikai jelentősége lehet bizonyos gyógyszerek felírásakor. A tanulmány azt próbálja megvizsgálni, hogy a CYP 2D6 metabolizáló állapotának ismerete hány betegnél befolyásolhatja a ténylegesen felírt gyógyszer kiválasztását. Ezen túlmenően azt tervezzük, hogy leírjuk a gyakori és releváns CYP 2D6 allélok megoszlását, beleértve azok kombinációit egy átlagos osztrák általános orvosi rendelőben, összehasonlítás céljából más kaukázusi populációkkal.
A tanulmány áttekintése
Állapot
Részletes leírás
Vizsgálati populáció:
A rendelő nem kiválasztott, egymást követő betegei, akik rutin vérvételre keresik fel a rendelőt különböző egészségügyi állapotok miatt, és akiknek CYP2D6 enzim által metabolizált (vagy a CYP 2D6 erős inhibitorai) gyógyszert írtak fel vagy írtak fel az elmúlt 3 évben . Csak ezeknél a betegeknél határozzák meg a CYP2D6 polimorfizmust az EDTA-vérminta egy töredékével. Nem végeznek további genetikai vizsgálatokat vagy további vérvételeket.
Azoknak a betegeknek, akik jogosultnak tekinthetők a vizsgálatban való részvételre, tájékozott beleegyező nyilatkozatot kell aláírniuk, miután tájékoztatták őket a vizsgálat céljairól.
Vérvétel és a minták feldolgozása:
Szabványosított vérmintavétel történik Vacutainer rendszerrel, EDTA cső (4 ml) megtöltésével a vörös- és fehérvérkép meghatározásához. Az összegyűjtött vérből 300 mikrolitert használunk fel a CYP2D6 polimorfizmus további meghatározására.
A DNS izolálása:
A DNS-t az EDTA vérből a gyakorlati laboratóriumban vonják ki a Spin Micro Extraction Kit® (ViennaLab, Vienna) segítségével. A DNS koncentrációját és minőségét Bio Photometer plus (Eppendorf) segítségével mérjük. Az extrahált DNS-t -81 °C-on ultraalacsony hőmérsékletű mélyhűtőben (U101-86, New Brunswick Scientific Co., Inc.) tároljuk minden további adalék nélkül.
Valós idejű PCR a CYP2D6 gén kópiaszámának meghatározásához:
A CYP2D6 gén kópiaszámának meghatározásához valós idejű PCR-t hajtanak végre három példányban ABI StepOnePlus-on a CYP2D6 RealFast™ CNV Assay (ViennaLab) segítségével a gyakorlati laboratóriumban.
A teszt a fluorogén 5' nukleáz teszten, más néven TaqMan® assay-n alapul. Mindegyik reakció gén-specifikus primerpárokat tartalmaz a CYP2D6 és az endogén kontroll (EC) génfragmensek amplifikálására, egyenként 141 bp-val. További komponensek két kettős jelölésű, génspecifikus hidrolízis próba, a FAM-mal jelölt CYP2D6 próba és a HEX-jelölt EC próba, amelyek az amplifikált fragmensek belső szekvenciájához hibridizálnak. Az 5'-fluoreszcens riporter és a 3'-kioltó festék közelsége az érintetlen próbákon megakadályozza, hogy a riporter fluoreszkáljon. A PCR kiterjesztési fázisában a Taq DNS polimeráz 5'-3' exonukleáz aktivitása lehasítja az 5'-fluoreszcens riportert a hibridizált próbáról. A fluorofor fizikai elválasztása a kvencserfestéktől valós időben fluoreszcens jelet generál, amely arányos a felhalmozott PCR-termékkel. A CYP2D6 RealFast™ CNV Assay egy relatív mennyiségi meghatározás, és összehasonlítja mindkét nukleinsav célpont (CYP2D6 és EC) mennyiségét a CYP2D6 CNV kalibrátorhoz viszonyítva. Az EC gént a különböző minták közötti fluoreszcencia jelek normalizálására használják, és PCR pozitív kontrollként szolgál.
Az adatok további normalizálására ROX festéket adunk 1 mikroliter végső koncentrációra a 2 x Probe Mix-hez.
RT- PCR cikluskörülmények az ABI StepOneplus ciklushoz: Kezdeti denaturálás: 95°C 10 perc 1 ciklus; denaturálás 95°C 15 mp 40 ciklus; lágyítás/nyújtás 60°C 1 perc.
PCR és hibridizáció a CYP2D6 allél meghatározásához a PGX-CYP2D StripAssay™ segítségével:
Ezt a vizsgálatot a minták egy részhalmazára használjuk ebben a vizsgálatban, és csak 3 polimorf lókuszt fed le: 1795delT (2D6*6), 1934G>A (2D6*4) és 2637delA (2D6*3). A vizsgálat elve és eljárása hasonló az alább leírt PGX-CYP2D6 XL StripAssay®-hez, de a Palm-Cycler (Corbett Life Science) különböző cikluskörülményeit alkalmazza: pre-PCR: 94 °C/2 perc; termociklus: 94°C/15 sec.- 58 °C/30 mp-72 °C/30 s (35 ciklus); végső meghosszabbítás: 72°C/3 perc.
PCR és hibridizáció a CYP2D6 allél meghatározásához a PGX-CYP2D6 XL StripAssay® segítségével:
19 klinikailag releváns CYP2D6 allél meghatározásához (*1; *2 A, *2 B-M; *3, *4A-H, K, L vagy P, *4J vagy N, *4M; *5; *6 A, B vagy D, *6C; *7, *8; *9; *10A vagy B, *10 C vagy D; *11; *12; *14; *15; *17; *29; *35; * 39; *40 vagy *58; *41) először PCR-amplifikációt hajtunk végre egy Palm-Cycler-en (Corbett Life Science, Eight Mile Plains, QLD 4113, Ausztrália) biotinilezett primerek alkalmazásával. Az amplifikációs termékeket tovább hibridizáljuk egy tesztcsíkhoz, amely allél-specifikus oligonukleotid próbákat tartalmaz, amelyek párhuzamos vonalak sorozataként immobilizáltak. A kötött biotinilezett szekvenciákat sztreptavidin-alkáli foszfatáz és színszubsztrátok segítségével mutatjuk ki. Ennek a reakciónak a kiértékelése manuálisan történik a StripAssay®-Evaluator (ViennaLab, Vienna) segítségével, amely egy szabadalmaztatott PC program a homozigóta vagy heterozigóta genotípus meghatározására.
A Palm-Cycler kerékpározási feltételei (Corbett Life Science): pre-PCR: 95°C/4 perc; termociklus: 95°C/25 sec.- 60 °C/ 45 s-72 °C/1 perc (36 ciklus); végső meghosszabbítás: 72°C/3 perc.
Statisztika:
Az adatokat a Microsoft Excel 10-es verziójával és az R Language and Environment for Statistical Computing and Graphics 2.9-es verziójával rögzítettük és elemeztük. Az adatok leírására standard módszereket alkalmazunk (kategorikus adatok esetén gyakoriság és százalék, folyamatos adatok esetén átlag és szórása). Az egyetlen praxisban felírt CYP2D6-specifikus gyógyszerek gyakoriságának összehasonlításához az Alsó-Ausztriában felírt összes receptszámmal Spearman rangkorrelációs együtthatóját számítjuk ki. A csoportok közötti különbségeket páros t-próbával számítottuk ki. A 0,05-nél kisebb p-érték statisztikai szignifikanciát jelez.
A Hardy-Weinberg egyensúlyt Fisher Exact Chi-Square teszttel számítottuk ki a genotípusok kis száma miatt.
Tanulmány típusa
Beiratkozás (Tényleges)
Kapcsolatok és helyek
Tanulmányi helyek
-
-
Lower Austria
-
Angern, Lower Austria, Ausztria, A 2261
- Practice Office
-
-
Részvételi kritériumok
Jogosultsági kritériumok
Tanulmányozható életkorok
Egészséges önkénteseket fogad
Tanulmányozható nemek
Mintavételi módszer
Tanulmányi populáció
Leírás
Bevételi kritériumok:
- Magas vérnyomás, cukorbetegség, krónikus szívelégtelenség, hiperlipidémia, depresszió, skizofrénia, szívritmuszavarok, pajzsmirigybetegségek és demencia klinikai diagnózisával rendelkező betegek
Kizárási kritériumok:
- akut fertőző betegségek
Tanulási terv
Hogyan készül a tanulmány?
Tervezési részletek
- Megfigyelési modellek: Egyéb
- Időperspektívák: Egyéb
Mit mér a tanulmány?
Elsődleges eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
A metabolizáló állapot (PM, IM, NM, UM) gyakorisága a betegekben
Időkeret: 1 év
|
Megjegyzés: minden résztvevő rendelkezik a) két egyedi CYP2D6 alléllel, b) e két allél kombinációjából egy egyedi genotípus származik és c) ebből a genotípusból származik a genetikailag meghatározott metabolizáló státusz (PM, IM, NM, UM). Egy beteg egy adott gyógyszer ultragyors (UM), normál (NM), közepes (IM) vagy gyenge metabolizálója (PM) lehet. |
1 év
|
|
A CYP2D6 allélok gyakorisága a betegekben
Időkeret: 1 év
|
19 különböző CYP2D6 allél gyakoriságát határozták meg 287 betegben. A 289 beteg közül 2 esetben a meghatározás technikai okok miatt nem volt lehetséges. Megjegyzés: minden résztvevő rendelkezik a) két egyedi CYP2D6 alléllel, b) e két allél kombinációjából egy egyedi genotípus származik és c) ebből a genotípusból származik a genetikailag meghatározott metabolizáló státusz (PM, IM, NM, UM). |
1 év
|
|
A CYP2D6 genotípusok gyakorisága a betegekben
Időkeret: 1 év
|
61 különböző CYP2D6 genotípus gyakoriságát határozták meg 287 betegben. A 289 beteg közül 2 esetben a meghatározás technikai okok miatt nem volt lehetséges. Megjegyzés: minden résztvevő rendelkezik a) két egyedi CYP2D6 alléllel, b) e két allél kombinációjából egy egyedi genotípus származik és c) ebből a genotípusból származik a genetikailag meghatározott metabolizáló státusz (PM, IM, NM, UM). |
1 év
|
Másodlagos eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
Azon résztvevők száma, akiknél a családorvos fontosnak tartotta metabolizáló állapotuk előzetes ismeretét, mielőtt a CYP2D6-specifikus gyógyszert felírták.
Időkeret: 1 év
|
Hány betegnél volt jelentősége a háziorvos CYP 2D6 metabolizáló státuszának (ultragyors (UM), normál (NM), közepes (IM) és gyenge (PM)) ismerete a CYP2D6 specifikus gyógyszer felírása előtt.
Megjegyzés: A megfelelő gyógyszert már az elemzés elvégzése előtt felírták.
|
1 év
|
|
A teljes praxispopuláció azon betegek száma, akiknek elektronikus egészségügyi nyilvántartását (EHR) értékelték.
Időkeret: 1 év
|
A praxispopuláció azon résztvevőinek fajlagos száma, akik felírták a CYP 2D6 által metabolizált gyógyszert az elmúlt 3 évben.
Ezeket az adatokat a praxis iroda elektronikus egészségügyi nyilvántartásaiból (EHR) vettük ki.
Ehhez az adatkinyeréshez nem volt szükség a vizsgálatba való beiratkozásra és a tájékozott hozzájárulás aláírására.
Nincs más adat (pl.
kiindulási értékeléseket, egyéb kimeneteleket és nemkívánatos eseményeket) gyűjtöttük össze ebben a csoportban.
|
1 év
|
Együttműködők és nyomozók
Nyomozók
- Kutatásvezető: Gustav Kamenski, Karl Landsteiner Institute for Systematics in General Medicine
Publikációk és hasznos linkek
Tanulmányi rekorddátumok
Tanulmány főbb dátumok
Tanulmány kezdete (Tényleges)
Elsődleges befejezés (Tényleges)
A tanulmány befejezése (Tényleges)
Tanulmányi regisztráció dátumai
Először benyújtva
Először nyújtották be, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Első közzététel (Tényleges)
Tanulmányi rekordok frissítései
Utolsó frissítés közzétéve (Tényleges)
Az utolsó frissítés elküldve, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Utolsó ellenőrzés
Több információ
A tanulmányhoz kapcsolódó kifejezések
Kulcsszavak
Egyéb vizsgálati azonosító számok
- KarlLandsteinerISGM CYP2D6
Terv az egyéni résztvevői adatokhoz (IPD)
Tervezi megosztani az egyéni résztvevői adatokat (IPD)?
IPD terv leírása
IPD megosztási időkeret
IPD-megosztási hozzáférési feltételek
Az IPD megosztását támogató információ típusa
- Tanulmányi Protokoll
- Statisztikai elemzési terv (SAP)
- Tájékozott hozzájárulási űrlap (ICF)
- Klinikai vizsgálati jelentés (CSR)
Gyógyszer- és eszközinformációk, tanulmányi dokumentumok
Egy amerikai FDA által szabályozott gyógyszerkészítményt tanulmányoz
Egy amerikai FDA által szabályozott eszközterméket tanulmányoz
Ezt az információt közvetlenül a clinicaltrials.gov webhelyről szereztük be, változtatás nélkül. Ha bármilyen kérése van vizsgálati adatainak módosítására, eltávolítására vagy frissítésére, kérjük, írjon a következő címre: register@clinicaltrials.gov. Amint a változás bevezetésre kerül a clinicaltrials.gov oldalon, ez a webhelyünkön is automatikusan frissül. .