Gingival Crevicular -nesteen karakterisointi oikomishoidon aikana

Kelpoisuuskriteerit ienpoistonesteen keräämiseen Sata tervettä, tupakoimatonta 11–35-vuotiasta potilasta, jotka tarvitsevat oikomishoitoa ensimmäisellä posliinipoistolla Illinoisin yliopiston Chicagon yliopiston oikomisklinikalla (UIC). olla mukana. Tietoinen suostumus esitetään potilaille ja vanhemmille [laillisille huoltajille] ja allekirjoitetaan ennen toimenpidettä. Potilas seulotaan sisällyttämiskriteerien suhteen suostumuksensa yhteydessä. Kirjallinen suostumus saadaan myös sivuaineista. Ennen hoitoa periapikaaliset röntgenkuvat otetaan molemmista yläkulmahampaista juuren pituuden ja morfologian tarkistamiseksi, jotta koiran kannattimien esivalmistetut voimavarret sulkeutuvat hampaiden vastuksen keskipisteestä. Kiinteät oikomislaitteet (0,018 tuumaa; MBT-resepti) sijoitetaan tutkittavaan yläleuan kulmahampaan kiinnikkeisiin pystysuoralla lisäraolla (Dentsply International, York, NY) valmiita voimavarsia varten. Koehenkilöt ohjataan yläleuan ensimmäisten esihammashampaiden poistoon. Väliaikainen kiinnityslaite sijoitetaan yläleuan toisen esihammasta ja poskihampaan väliin 5 mm etäisyydelle alveolaarisesta harjasta kiinnitystä ja vertailua varten. Leuan kaaren hampaat tasoitetaan ja kohdistetaan ennen koiran vetäytymistä. Kerran 0,016 x 0,016 ruostumattomasta teräksestä valmistetut kaarilangat (Dentsply International) asetetaan, koiran sisäänveto saadaan aikaan käyttämällä kalibroituja 70 g nikkeli-titaania sulkevia kierrejousia (Dentsply International), jotka on kytketty väliaikaisesta kiinnityslaitteesta hampaan kiinnikkeiden voimavarteen, joka salli sovelluksen voimasta lähempänä hampaan vastuskeskusta.

Iennesteen kerääminen Potilaat istutetaan hammaslääkärin tuoliin pystyasennossa. Valittu paikka ilmakuivataan ja eristetään puuvillarullilla. Koskematta marginaalista ientä, supragingivaalinen plakki poistetaan, jotta vältetään paperiliuskojen kontaminaatio. Imukykyiset paperiliuskat asetetaan varovasti uurteeseen ja imeytyneet paperiliuskat yhdistetään ja asetetaan steriiliin Eppendorf-putkeen, joka sisältää 200 ul fosfaattipuskuriliuosta. Kerätty näyte koodataan yksilöllisillä tunnusnumeroilla ja säilytetään -80 C:ssa analysointiin asti. Tunnistusavain säilytetään lukitussa kaapissa Rm#237B, College of Dentistry. Oikomishoidon jälkeen potilasta neuvotaan olemaan ottamatta tulehduskipulääkkeitä vaan parasetamolia. GCF-keräys suoritetaan ennen kiinnikkeen asettamista, ennen koiran sisäänvetoa, 2 viikkoa koiran sisäänvetämisen jälkeen, 5 viikkoa koiran sisäänvetämisen jälkeen ja 7 viikkoa koiran sisäänvetämisen jälkeen.

Suunsisäinen skannaus Potilaiden okkluusio ja leuat skannataan intraoraalisella digitaalisella skannerilla. Intraoraalinen skannaus suoritetaan korkeimmalla resoluutiolla kullakin tutkittavalla aikapisteellä. Skannaustiedot viedään stereolitografian binääritiedostomuodossa (.stl) ja tuodaan kehittyneeseen käsittelyohjelmistopakettiin (Geomagic® Control 14, Geomagic®, Research Triangle Park, NC, USA). Referenssipisteinä käytetään miniruuvia ja palataalirugae-rakennetta

Lankojen asettaminen ja oikomishoito Potilaat sidotaan kiinnikkeillä ja 0,016x0,016" ruostumaton teräslanka asetetaan ja sidotaan kiinnikkeisiin kumirenkailla. Potilas palaa oikomishoitoon näytteenottoajan mukaan ja kerran kuukaudessa tutkimuksen jälkeen.

ELISA GCF-näytteet homogenoidaan ensin 30 s ja sentrifugoidaan 5 minuuttia 1500 g:ssä eluoituakseen. Eluaattia käytetään sitten näytteenä ELISA-estimointiin GCF-näytteistä. GCF-näyte havaitaan OPG ja RANKL. OPG:n ja RANKL:n suhde lasketaan ja määrittää PDL:n potentiaalin aktivoida osteoklasteja.

mikroRNA-analyysi Kokonais-RNA uutetaan tallennetuista GCF-näytteistä käyttämällä miRNeasy seerumi/plasma -sarjaa (Qiagen, Valencia, CA). Kokonais-RNA:n määrä määritetään NanoDrop-spektrofotometrillä (Thermoscientific). Kokonais-RNA alistetaan kvantitatiiviselle reaaliaikaiselle RT-PCR:lle käyttäen Taqman® microRNA RT-PCR -määrityksiä, jotka ovat spesifisiä hsa-miR-21:lle, -29a:lle, b:lle ja c:lle. hsa-let-7d, g ja i käytetään sisäisenä kontrollina. Kunkin kohteen näytteet analysoidaan käyttämällä 7900HT reaaliaikaista PCR-järjestelmää (Applied Biosystems).