Charakterisierung der Zahnfleischspaltflüssigkeit während einer kieferorthopädischen Behandlung

Zulassungskriterien für die Sammlung von Zahnfleischspaltflüssigkeit Einhundert gesunde Nichtraucherpatienten im Alter von 11 bis 35 Jahren, die eine kieferorthopädische Behandlung mit Extraktion des ersten Prämolaren in der kieferorthopädischen Klinik am College of Dentistry der University of Illinois at Chicago (UIC) benötigen, werden behandelt enthalten sein. Die Einverständniserklärung wird den Patienten und den Eltern [Erziehungsberechtigten] vorgelegt und vor dem Eingriff unterzeichnet. Der Patient wird zum Zeitpunkt der Einwilligung auf die Einschlusskriterien überprüft. Die schriftliche Zustimmung wird auch für Nebenfächer eingeholt. Vor der Behandlung werden periapikale Röntgenaufnahmen beider Eckzähne des Oberkiefers angefertigt, um die Wurzellänge und -morphologie zu überprüfen, damit die vorgefertigten Kraftarme an den Eckzahnbrackets bis zum Widerstandszentrum der Eckzähne geschlossen werden. Festsitzende kieferorthopädische Apparaturen (0,018 Zoll; MBT-Verordnung) werden mit einem zusätzlichen vertikalen Schlitz in den Oberkiefer-Eckzahnklammern (Dentsply International, York, NY) im Probanden platziert, um die vorgefertigten Kraftarme aufzunehmen. Die Probanden werden zur Extraktion der ersten Prämolaren im Oberkiefer überwiesen. Zu Verankerungs- und Referenzzwecken wird eine temporäre Verankerungsvorrichtung zwischen dem zweiten Prämolaren des Oberkiefers und dem ersten Molaren des Oberkiefers, 5 mm vom Alveolarkamm entfernt, platziert. Die Zähne im Oberkieferbogen werden vor der Eckzahnretraktion nivelliert und ausgerichtet. Einmal 0,016x0,016 Wenn Edelstahlbögen (Dentsply International) platziert werden, wird die Eckzahnretraktion durch kalibrierte 70 g schwere Nickel-Titan-Schließfedern (Dentsply International) erreicht, die von einer temporären Verankerungsvorrichtung mit dem Kraftarm an den Eckzahnbrackets verbunden sind, die die Anwendung ermöglichten der Kraft näher am Widerstandszentrum des Zahns.

Sammlung von Zahnfleischspaltflüssigkeit. Die Patienten sitzen aufrecht im Behandlungsstuhl. Die ausgewählte Stelle wird luftgetrocknet und mit Watterollen isoliert. Ohne die marginale Gingiva zu berühren, wird die supragingivale Plaque entfernt, um eine Kontamination der Papierstreifen zu vermeiden. Die absorbierenden Papierstreifen werden vorsichtig im Sulcus platziert und die absorbierten Papierstreifen werden gepoolt und in ein steriles Eppendorf-Röhrchen mit 200 µl phosphatgepufferter Kochsalzlösung gegeben. Die gesammelte Probe wird mit eindeutigen ID-Nummern codiert und bis zur Analyse bei -80 °C aufbewahrt. Der Schlüssel für die Identifikation wird in einem verschlossenen Schrank in Rm#237B, College of Dentistry, aufbewahrt. Der Patient wird darüber informiert, nach der kieferorthopädischen Behandlung keine NSAR, sondern Paracetamol einzunehmen. Die Sammlung von GCF erfolgt vor der Platzierung der Brackets, vor dem Zurückziehen des Eckzahns, 2 Wochen nach dem Zurückziehen des Eckzahns, 5 Wochen nach dem Zurückziehen des Eckzahns und 7 Wochen nach dem Zurückziehen des Eckzahns.

Intraorales Scannen Die Okklusion und der Kiefer des Patienten werden mit einem intraoralen Digitalscanner gescannt. Das intraorale Scannen wird zu jedem untersuchten Zeitpunkt mit der höchsten Auflösung durchgeführt. Die Scandaten werden als Stereolithographie-Binärdateiformat (.stl) exportiert und in ein hochentwickeltes Verarbeitungssoftwarepaket (Geomagic® Control 14, Geomagic®, Research Triangle Park, NC, USA) importiert. Als Referenzpunkte dienen die Minischrauben und die Gaumenfaltenstruktur

Drahtplatzierung und kieferorthopädische Behandlung. Die Patienten werden mit Brackets und 0,016 x 0,016 Zoll befestigt. Edelstahldraht wird platziert und mit Gummiringen an den Brackets befestigt. Der Patient wird zur kieferorthopädischen Behandlung entsprechend der Zeit der Probenentnahme und einmal im Monat nach der Studie wiederkommen.

ELISA Die GCF-Proben werden zunächst 30 s lang homogenisiert und zur Elution 5 min lang bei 1500 g zentrifugiert. Das Eluat wird dann als Probe für die ELISA-Schätzung aus GCF-Proben verwendet. In der GCF-Probe werden OPG und RANKL erkannt. Das Verhältnis von OPG und RANKL wird berechnet und bestimmt das Potenzial von PDL zur Aktivierung von Osteoklasten.

microRNA-Analyse Die Gesamt-RNA wird aus den gelagerten GCF-Proben mit dem miRNeasy Serum/Plasma-Kit (Qiagen, Valencia, CA) extrahiert. Die Menge der Gesamt-RNA wird mit einem NanoDrop-Spektrophotometer (Thermoscientific) bestimmt. Die Gesamt-RNA wird einer quantitativen Echtzeit-RT-PCR unter Verwendung von Taqman® microRNA RT-PCR-Assays unterzogen, die spezifisch für hsa-miR-21, -29a, b und c sind. hsa-let-7d, g und i werden als interne Kontrolle verwendet. Die Proben von jedem Probanden werden mit einem 7900HT-Echtzeit-PCR-System (Applied Biosystems) analysiert.