Karakterisering av tandköttets crevikulära vätska under ortodontisk behandling

Behörighetskriterier för insamling av tandköttskrevikelvätska Etthundra friska, icke-rökare patienter i åldern 11-35 år som behöver ortodontisk behandling med första premolarextraktion på ortodontiska kliniken vid College of Dentistry, University of Illinois i Chicago (UIC) kommer att inkluderas. Det informerade samtycket kommer att presenteras för patienter och föräldrar [vårdnadshavare] och undertecknas före proceduren. Patienten kommer att screenas för inklusionskriterierna vid tidpunkten för samtycke. Det skriftliga samtycket erhålls även från biämnen. Före behandlingen kommer periapikala röntgenbilder att tas på båda maxillära hörntänderna för att verifiera rotlängden och morfologin så att de prefabricerade kraftarmarna på hundfästena stängs mot mitten av motståndet hos hundarna. Fasta ortodontiska apparater (0,018-tum; MBT-recept) kommer att placeras i objektet med en extra vertikal slits i överkäkshundfästena (Dentsply International, York, NY) för att rymma de prefabricerade kraftarmarna. Försökspersonerna kommer att remitteras för extraktion av de maxillära första premolarerna. En temporär förankringsanordning kommer att placeras mellan den maxillära andra premolaren och den maxillära första molaren, 5 mm från alveolkrönet för förankrings- och referensändamål. Tänderna i överkäksbågen kommer att jämnas ut och inriktas innan hunden dras tillbaka. En gång 0,016x0,016 bågtrådar av rostfritt stål (Dentsply International) placeras, kommer hundens indragning att uppnås med hjälp av kalibrerade 70-g nickel-titan spiralfjädrar (Dentsply International) anslutna från en tillfällig förankringsanordning till kraftarmen på hundfästena som möjliggjorde applikationen av kraften närmare tandens motståndscentrum.

Uppsamling av gingival crevikulär vätska Patienterna kommer att sitta i tandläkarstolen i upprätt läge. Den valda platsen kommer att lufttorkas och isoleras med bomullsrullar. Utan att röra den marginala tandköttet kommer supragingival plack att avlägsnas för att undvika kontaminering av pappersremsorna. De absorberande pappersremsorna kommer att placeras försiktigt i sulcus och de absorberade pappersremsorna kommer att slås samman och placeras i ett sterilt Eppendorf-rör innehållande 200 ul fosfatbuffertsaltlösning. Det insamlade provet kommer att kodas med unika ID-nummer och förvaras vid -80C tills det analyseras. Nyckeln för identifieringarna kommer att förvaras i ett låst skåp i Rm#237B, College of Dentistry. Patienten kommer att informeras om att inte ta NSAID utan paracetamol efter den ortodontiska behandlingen. Insamlingen av GCF kommer att utföras före placering av fästet, före hundretraktion, 2 veckor efter hundretraktion, 5 veckor efter hundretraktion och 7 veckor efter hundretraktion.

Intraoral skanning Patienternas ocklusion och käkar kommer att skannas med en intraoral digital skanner. Den intraorala skanningen kommer att utföras med högsta upplösning vid varje studerad tidpunkt. Skanningsdata kommer att exporteras som binärt stereolitografisk filformat (.stl) och importeras till ett sofistikerat bearbetningsmjukvarupaket (Geomagic® Control 14, Geomagic®, Research Triangle Park, NC, USA). Miniskruvarna och palatal rugae-strukturen kommer att användas som referenspunkter

Trådplacering och ortodontisk behandling Patienterna kommer att fästas med konsoler och 0,016x0,016" rostfri ståltråd kommer att placeras och bindas på fästena med gummiringar. Patienten kommer att schemaläggas att komma tillbaka för ortodontisk behandling enligt provtagningstiden och en gång i månaden efter studien.

ELISA GCF-proverna kommer först att homogeniseras i 30 sekunder och centrifugeras i 5 minuter vid 1500 g för att eluera. Eluen kommer sedan att användas som ett prov för ELISA-uppskattning från GCF-prover. GCF-provet kommer att detekteras OPG och RANKL. Andelen OPG och RANKL kommer att beräknas och bestämma potentialen för PDL för att aktivera osteoklaster.

mikroRNA-analys Totalt RNA kommer att extraheras från de lagrade GCF-proverna med hjälp av miRNeasy serum/plasma-kit (Qiagen, Valencia, CA). Mängden av det totala RNA:t kommer att bestämmas med NanoDrop spektrofotometer (termovetenskaplig). Det totala RNA:t kommer att utsättas för kvantitativ realtids-RT-PCR med Taqman® microRNA RT-PCR-analyser specifika för hsa-miR-21, -29a, b och c. hsa-let-7d, g och i kommer att användas som intern kontroll. Proverna från varje individ kommer att analyseras med ett 7900HT realtids-PCR-system (Applied Biosystems).