Karakterisering av gingival crevikulær væske under kjeveortopedisk behandling

Kvalifikasjonskriterier for innsamling av gingival crevicular væske Ett hundre friske, ikke-røykende pasienter i alderen 11-35 år som trenger kjeveortopedisk behandling med første premolar ekstraksjon ved kjeveortopedisk klinikk ved College of Dentistry, University of Illinois i Chicago (UIC) vil inkluderes. Det informerte samtykket vil bli presentert for pasienter og forelder(e) [verge(r)] og signert før prosedyren. Pasienten vil bli screenet for inklusjonskriteriene på tidspunktet for samtykke. Det vil også innhentes skriftlig samtykke fra bifag. Før behandlingen vil det bli tatt periapikale røntgenbilder av begge maxillære hjørnetenner for å verifisere rotlengden og morfologien, slik at de prefabrikerte kraftarmene på hjørnetannbrakettene vil være lukket mot midten av motstanden til hjørnetennene. Faste kjeveortopedisk apparater (0,018-tommer; MBT-resept) vil bli plassert i forsøkspersonen med et ekstra vertikalt spor i maxillary canine-brakettene (Dentsply International, York, NY) for å romme de prefabrikkerte kraftarmene. Forsøkspersonene vil bli henvist for ekstraksjon av de maxillære første premolarene. En midlertidig forankringsanordning vil bli plassert mellom maksillær andre premolar og maxillær første molar, 5 mm fra alveolar kam for forankring og referanseformål. Tennene i overkjevebuen vil bli utjevnet og justert før hundens tilbaketrekning. En gang 0,016x0,016 rustfrie stålbuetråder (Dentsply International) er plassert, vil hundetraksjonen oppnås ved å bruke kalibrerte 70 g nikkel-titan spiralfjærer (Dentsply International) koblet fra en midlertidig forankringsanordning til kraftarmen på hjørnetannbrakettene som tillot applikasjonen av kraften nærmere motstandssenteret til tannen.

Oppsamling av gingival crevikulær væske Pasienter vil sitte i tannlegestolen i oppreist stilling. Det valgte stedet vil bli lufttørket og isolert med bomullsruller. Uten å berøre den marginale gingiva, vil supragingival plakk fjernes for å unngå kontaminering av papirstrimlene. De absorberende papirstrimlene vil bli plassert forsiktig i sulcus og de absorberte papirstrimlene vil bli samlet og plassert i et sterilt Eppendorf-rør som inneholder 200 ul fosfatbuffer saltvann. Den innsamlede prøven vil bli kodet med unike ID-numre og oppbevares ved -80C inntil analysert. Nøkkelen til identifikasjonene vil bli oppbevart i et låst skap i Rm#237B, College of Dentistry. Pasienten vil bli informert om ikke å ta NSAIDs men paracetamol etter kjeveortopedisk behandling. Innsamlingen av GCF vil bli utført før brakettplassering, før hundetraksjon, 2 uker etter hundetraksjon, 5 uker etter hundetraksjon og 7 uker etter hundetraksjon.

Intraoral skanning Pasientens okklusjon og kjever vil bli skannet ved hjelp av en intraoral digital skanner. Den intraorale skanningen vil bli utført med høyeste oppløsning på hvert studert tidspunkt. Skannedataene vil bli eksportert som binært stereolitografisk filformat (.stl) og importert til en sofistikert programvarepakke (Geomagic® Control 14, Geomagic®, Research Triangle Park, NC, USA). Miniskruene og palatal rugae-strukturen vil bli brukt som referansepunkter

Trådplassering og kjeveortopedisk behandling Pasientene vil bli bundet med braketter og 0,016x0,016" rustfri ståltråd vil bli plassert og festet på brakettene med gummiringer. Pasienten vil etter planen komme tilbake for kjeveortopedisk behandling i henhold til prøvetakingstiden og en gang i måneden etter studien.

ELISA GCF-prøvene blir først homogenisert i 30 s og sentrifugert i 5 minutter ved 1500 g for å eluere. Elueringen vil deretter brukes som en prøve for ELISA-estimering fra GCF-prøver. GCF-prøven vil bli oppdaget OPG og RANKL. Rasjonen av OPG og RANKL vil bli beregnet og bestemme potensialet til PDL for å aktivere osteoklaster.

mikroRNA-analyse Totalt RNA vil bli ekstrahert fra de lagrede GCF-prøvene ved å bruke miRNeasy serum/plasma-sett (Qiagen, Valencia, CA). Mengden av det totale RNA vil bli bestemt av NanoDrop spektrofotometer (termovitenskapelig). Det totale RNA vil bli utsatt for kvantitativ sanntids RT-PCR ved bruk av Taqman® microRNA RT-PCR-analyser spesifikke for hsa-miR-21, -29a, b og c. hsa-let-7d, g og i vil bli brukt som internkontroll. Prøvene fra hvert individ vil bli analysert ved hjelp av et 7900HT sanntids PCR-system (Applied Biosystems).