正畸治疗期间龈沟液的特征

收集龈沟液的资格标准 100 名 11-35 岁的健康、不吸烟的患者需要在芝加哥伊利诺伊大学 (UIC) 牙科学院正畸诊所进行正畸治疗并拔除第一前磨牙。被包括在内。 知情同意书将提交给患者和父母 [法定监护人] 并在手术前签署。 在同意时将根据纳入标准筛选患者。 书面同意也将从未成年人获得。 治疗前，将拍摄双侧上颌尖牙的根尖片，以验证牙根长度和形态，使尖牙托槽上的预制动力臂靠近尖牙的阻力中心。 固定正畸矫治器（0.018 英寸；MBT 处方）将被放置在受试者体内，上颌尖牙托槽（Dentsply International，York，NY）中有一个辅助垂直槽，以容纳预制动力臂。 受试者将被转介拔除上颌第一前磨牙。 将在上颌第二前磨牙和上颌第一磨牙之间放置一个临时支抗装置，距离牙槽嵴 5 毫米，用于支抗和参考目的。 在尖牙收缩之前，上颌弓中的牙齿将被整平和对齐。 一次 0.016x0.016 放置不锈钢弓丝（Dentsply International），使用校准的 70-g 镍钛闭合螺旋弹簧（Dentsply International）实现尖牙收缩，该弹簧从临时锚固装置连接到允许应用的尖牙支架上的动力臂靠近牙齿阻力中心的力。

收集龈沟液 患者将以直立姿势坐在牙科椅上。 选定的地点将被风干并用棉卷隔离。 在不接触边缘牙龈的情况下，去除龈上牙菌斑以避免污染纸条。 吸水纸条将被轻轻放置在沟中，吸收的纸条将汇集并放置在含有 200 ul 磷酸盐缓冲盐水的无菌 Eppendorf 管中。 收集的样本将使用唯一的 ID 编号进行编码，并保存在 -80°C 直至进行分析。 身份证明的钥匙将保存在牙科学院 Rm#237B 的上锁柜子中。 患者将被告知在正畸治疗后不要服用非甾体抗炎药，而是服用扑热息痛。 GCF的收集将在托槽放置前、尖牙回缩前、尖牙回缩后2周、尖牙回缩后5周和尖牙回缩后7周进行。

口内扫描 患者的咬合和颌骨将使用口内数字扫描仪进行扫描。 口腔内扫描将在每个研究时间点以最高分辨率进行。 扫描数据将导出为立体光刻二进制文件格式 (.stl)，并导入到复杂的处理软件包（Geomagic® Control 14，Geomagic®，Research Triangle Park，NC，USA）。 微螺钉和腭皱结构将用作参考点

线材放置和正畸治疗患者将与托槽和 0.016x0.016" 粘合 将放置不锈钢丝并用橡胶圈将其结扎到托槽上。 根据样本采集时间和研究后每月一次安排患者回来进行正畸治疗。

ELISA GCF样品先匀浆30秒，1500g离心5分钟洗脱。 然后将洗脱液用作 GCF 样品的 ELISA 估计样品。 GCF样本将检测OPG和RANKL。 将计算 OPG 和 RANKL 的比例并确定 PDL 激活破骨细胞的潜力。

microRNA 分析 将使用 miRNeasy 血清/血浆试剂盒（Qiagen，Valencia，CA）从储存的 GCF 样品中提取总 RNA。 总 RNA 的量将通过 NanoDrop 分光光度计 (Thermoscientific) 测定。 使用对 hsa-miR-21、-29a、b 和 c 具有特异性的 Taqman® microRNA RT-PCR 测定法对总 RNA 进行定量实时 RT-PCR。 hsa-let-7d、g 和 i 将用作内部对照。 来自每个受试者的样本将使用 7900HT 实时 PCR 系统（Applied Biosystems）进行分析。