Charakterizace gingivální crevikulární tekutiny během ortodontické léčby

Kritéria způsobilosti pro odběr gingivální štěrbinové tekutiny Sto zdravých, nekuřáckých pacientů ve věku 11-35 let, kteří vyžadují ortodontickou léčbu s první extrakcí premoláru na ortodontické klinice na College of Dentistry, University of Illinois v Chicagu (UIC) bude být zahrnut. Informovaný souhlas bude předložen pacientům a rodičům [zákonným zástupcům] a podepsán před výkonem. V době udělení souhlasu bude pacient vyšetřen na kritéria zařazení. Písemný souhlas bude rovněž získán od vedlejších subjektů. Před ošetřením budou pořízeny periapikální rentgenové snímky obou čelistních špičáků, aby se ověřila délka a morfologie kořene, takže prefabrikovaná ramena na konzolách špičáků budou uzavřena do středu odporu špičáků. Fixní ortodontické aparáty (0,018 palce; předpis MBT) budou umístěny do subjektu s pomocnou vertikální štěrbinou v držákech maxilárního špičáku (Dentsply International, York, NY) pro umístění prefabrikovaných silových ramen. Subjekty budou odeslány k extrakci prvních čelistních premolárů. Mezi maxilární druhý premolár a první maxilární molár, 5 mm od alveolárního hřebene, bude umístěno dočasné kotvící zařízení pro účely ukotvení a reference. Zuby v čelistním oblouku budou vyrovnány a vyrovnány před zatažením špičáku. Jednou 0,016x0,016 jsou umístěny obloukové dráty z nerezové oceli (Dentsply International), zatažení špičáku bude dosaženo pomocí kalibrovaných 70g nikl-titanových uzavíracích spirálových pružin (Dentsply International) připojených z dočasného kotvícího zařízení k silovému ramenu na konzolách špičáku, které umožňovaly aplikaci síly blíže ke středu odporu zubu.

Odběr gingivální štěrbinové tekutiny Pacienti budou sedět na stomatologickém křesle ve vzpřímené poloze. Vybrané místo bude vysušeno na vzduchu a izolováno bavlněnými smotky. Aniž byste se dotkli okrajové gingivy, supragingivální plak bude odstraněn, aby se zabránilo kontaminaci papírových proužků. Absorpční papírové proužky budou jemně umístěny do sulku a absorbované papírové proužky budou spojeny a umístěny do sterilní Eppendorfovy zkumavky obsahující 200 ul fyziologického roztoku s fosfátovým pufrem. Odebraný vzorek bude kódován jedinečnými ID čísly a uchováván při -80 °C až do analýzy. Klíč k identifikaci bude uložen v zamčené skříni v Rm#237B, College of Dentistry. Pacient bude informován, aby po ortodontické léčbě neužíval NSA, ale paracetamol. Odběr GCF bude proveden před umístěním držáku, před retrakcí špičáku, 2 týdny po retrakci špičáku, 5 týdnů po retrakce špičáku a 7 týdnů po retrakci špičáku.

Intraorální skenování Okluze a čelisti pacientů budou skenovány pomocí intraorálního digitálního skeneru. Intraorální skenování bude prováděno s nejvyšším rozlišením v každém studovaném časovém bodě. Skenovaná data budou exportována jako stereolitografický binární formát souboru (.stl) a importována do sofistikovaného softwarového balíku pro zpracování (Geomagic® Control 14, Geomagic®, Research Triangle Park, NC, USA). Jako referenční body budou použity minišrouby a struktura palatal rugae

Umístění drátu a ortodontická léčba Pacienti budou spojeni pomocí držáků a 0,016x0,016" nerezový drát bude umístěn a navázán na držáky pomocí pryžových kroužků. Návrat pacienta na ortodontickou léčbu bude naplánován podle doby odběru vzorku a jednou měsíčně po ukončení studie.

ELISA Vzorky GCF budou nejprve homogenizovány po dobu 30 s a centrifugovány po dobu 5 minut při 1500 g k eluci. Eluát bude poté použit jako vzorek pro odhad ELISA ze vzorků GCF. Vzorek GCF bude detekován OPG a RANKL. Vypočte se poměr OPG a RANKL a určí se potenciál PDL aktivovat osteoklasty.

analýza mikroRNA Celková RNA bude extrahována z uložených vzorků GCF pomocí soupravy miRNeasy sérum/plazma (Qiagen, Valencia, CA). Množství celkové RNA bude stanoveno spektrofotometrem NanoDrop (Thermoscientific). Celková RNA bude podrobena kvantitativní RT-PCR v reálném čase pomocí testů Taqman® microRNA RT-PCR specifických pro hsa-miR-21, -29a, bac. hsa-let-7d, g a i budou použity jako vnitřní kontrola. Vzorky od každého subjektu budou analyzovány pomocí systému 7900HT realtime PCR (Applied Biosystems).