Caracterização do fluido crevicular gengival durante o tratamento ortodôntico

Critérios de elegibilidade para a coleta de fluido crevicular gengival Cem pacientes saudáveis, não fumantes, com idade entre 11 e 35 anos, que necessitam de tratamento ortodôntico com extração do primeiro pré-molar na clínica ortodôntica da Faculdade de Odontologia da Universidade de Illinois em Chicago (UIC). ser incluido. O consentimento informado será apresentado aos pacientes e pais [responsáveis ​​legais] e assinado antes do procedimento. O paciente será triado para os critérios de inclusão no momento do consentimento. O consentimento por escrito também será obtido de assuntos menores. Antes do tratamento, serão feitas radiografias periapicais de ambos os caninos superiores para verificar o comprimento e a morfologia da raiz, para que os braços de força pré-fabricados nos braquetes caninos sejam fechados ao centro de resistência dos caninos. Aparelhos ortodônticos fixos (0,018 pol.; prescrição MBT) serão colocados no sujeito com uma ranhura vertical auxiliar nos braquetes dos caninos superiores (Dentsply International, York, NY) para acomodar os braços de força pré-fabricados. Os sujeitos serão encaminhados para extração dos primeiros pré-molares superiores. Um dispositivo de ancoragem temporária será colocado entre o segundo pré-molar superior e o primeiro molar superior, a 5 mm da crista alveolar para fins de ancoragem e referência. Os dentes no arco superior serão nivelados e alinhados antes da retração dos caninos. Uma vez 0,016x0,016 arcos de aço inoxidável (Dentsply International), a retração do canino será realizada usando molas de fechamento de níquel-titânio calibradas de 70 g (Dentsply International) conectadas de um dispositivo de ancoragem temporária ao braço de força nos braquetes caninos que permitiram a aplicação da força mais próxima do centro de resistência do dente.

Coleta de fluido crevicular gengival Os pacientes serão sentados na cadeira odontológica em posição vertical. O local selecionado será seco ao ar e isolado com rolos de algodão. Sem tocar na gengiva marginal, a placa supragengival será removida para evitar a contaminação das tiras de papel. As tiras de papel absorvente serão colocadas suavemente no sulco e as tiras de papel absorvidas serão agrupadas e colocadas em um tubo Eppendorf estéril contendo 200 ul de tampão fosfato salino. A amostra coletada será codificada com números de identificação exclusivos e mantida a -80C até ser analisada. A chave para as identificações ficará guardada em um armário trancado na Rm#237B, Faculdade de Odontologia. O paciente será informado para não tomar AINEs, mas paracetamol após o tratamento ortodôntico. A coleta do GCF será realizada antes da colocação do braquete, antes da retração do canino, 2 semanas após a retração do canino, 5 semanas após a retração do canino e 7 semanas após a retração do canino.

Escaneamento intraoral A oclusão e os maxilares dos pacientes serão escaneados usando um scanner digital intraoral. A varredura intraoral será realizada na resolução mais alta em cada ponto de tempo estudado. Os dados escaneados serão exportados em formato de arquivo binário de estereolitografia (.stl) e importados para um sofisticado pacote de software de processamento (Geomagic® Control 14, Geomagic®, Research Triangle Park, NC, EUA). Os mini-parafusos e a estrutura das rugas palatinas serão usados ​​como pontos de referência

Colocação de fios e tratamento ortodôntico Os pacientes serão colados com braquetes e braquetes 0,016x0,016" fio de aço inoxidável será colocado e ligado aos bráquetes com anéis de borracha. O retorno do paciente para o tratamento ortodôntico será agendado de acordo com o horário da coleta das amostras e uma vez por mês após o estudo.

ELISA As amostras GCF serão primeiro homogeneizadas por 30 s e centrifugadas por 5 min a 1500 g para eluir. O eluído será então usado como amostra para estimativa de ELISA a partir de amostras GCF. A amostra GCF será detectada OPG e RANKL. A relação de OPG e RANKL será calculada e determinará o potencial de PDL para ativar osteoclastos.

análise de microRNA O RNA total será extraído das amostras GCF armazenadas usando o kit de soro/plasma miRNeasy (Qiagen, Valencia, CA). A quantidade de RNA total será determinada por espectrofotômetro NanoDrop (Thermoscientific). O RNA total será submetido a RT-PCR quantitativo em tempo real utilizando ensaios Taqman® microRNA RT-PCR específicos para hsa-miR-21, -29a, b e c. hsa-let-7d, g e i serão usados ​​como um controle interno. As amostras de cada indivíduo serão analisadas usando um sistema de PCR em tempo real 7900HT (Applied Biosystems).