Charakterystyka płynu dziąsłowego podczas leczenia ortodontycznego

Kryteria kwalifikacji do pobrania płynu dziąsłowego Stu zdrowych, niepalących pacjentów w wieku 11-35 lat, którzy wymagają leczenia ortodontycznego z ekstrakcją pierwszego zęba przedtrzonowego w klinice ortodontycznej College of Dentistry, University of Illinois at Chicago (UIC) być uwzględnionym. Świadoma zgoda zostanie przedstawiona pacjentom i rodzicom [opiekunom prawnym] i podpisana przed zabiegiem. Pacjent zostanie poddany badaniu przesiewowemu pod kątem kryteriów włączenia w momencie wyrażenia zgody. Pisemna zgoda będzie również uzyskiwana od podmiotów drugorzędnych. Przed zabiegiem zostaną wykonane zdjęcia RTG okołowierzchołkowe obu kłów szczęki w celu zweryfikowania długości i morfologii korzeni, tak aby prefabrykowane ramiona zasilające na zamkach kłów były zamknięte w środku oporu kłów. Stałe aparaty ortodontyczne (0,018 cala; recepta MBT) zostaną umieszczone u pacjenta z pomocniczym pionowym otworem w zamkach kłów szczęki (Dentsply International, York, NY), aby pomieścić prefabrykowane ramiona wspomagające. Pacjenci będą kierowani na ekstrakcje pierwszych zębów przedtrzonowych szczęki. Tymczasowe urządzenie kotwiczące zostanie umieszczone między drugim przedtrzonowcem szczęki a pierwszym trzonowcem szczęki, 5 mm od grzebienia wyrostka zębodołowego w celu zakotwiczenia i odniesienia. Zęby w łuku szczękowym zostaną wyrównane i wyrównane przed retrakcją kłów. Raz 0,016x0,016 łuki ze stali nierdzewnej (Dentsply International), retrakcja kłów zostanie osiągnięta za pomocą skalibrowanych 70 g niklowo-tytanowych sprężyn zamykających (Dentsply International) połączonych z tymczasowego urządzenia kotwiczącego z ramieniem zasilającym na zamkach kłowych, które umożliwiły zastosowanie siły bliżej środka oporu zęba.

Pobieranie płynu dziąsłowego Pacjenci siedzą na fotelu dentystycznym w pozycji pionowej. Wybrane miejsce zostanie wysuszone na powietrzu i odizolowane za pomocą wacików. Bez dotykania dziąsła brzeżnego płytka nazębna naddziąsłowa zostanie usunięta, aby uniknąć zanieczyszczenia pasków papieru. Paski bibuły chłonnej zostaną delikatnie umieszczone w bruździe, a wchłonięte paski bibuły zostaną zebrane i umieszczone w sterylnej probówce Eppendorfa zawierającej 200 ul soli fizjologicznej buforowanej fosforanem. Pobrana próbka zostanie zakodowana unikalnymi numerami identyfikacyjnymi i będzie przechowywana w temperaturze -80°C do czasu analizy. Klucz do identyfikacji będzie przechowywany w zamkniętej szafce w Rm#237B, College of Dentistry. Pacjent zostanie poinformowany, aby po leczeniu ortodontycznym nie przyjmował NLPZ tylko paracetamolu. Pobranie GCF zostanie przeprowadzone przed umieszczeniem zamka, przed retrakcją kłów, 2 tygodnie po retrakcji kłów, 5 tygodni po retrakcji kłów i 7 tygodni po retrakcji kłów.

Skanowanie wewnątrzustne Zgryz i szczęki pacjentów będą skanowane za pomocą wewnątrzustnego skanera cyfrowego. Skanowanie wewnątrzustne zostanie wykonane w najwyższej rozdzielczości w każdym badanym punkcie czasowym. Dane ze skanowania zostaną wyeksportowane jako plik binarny w formacie stereolitografii (.stl) i zaimportowane do zaawansowanego pakietu oprogramowania do przetwarzania (Geomagic® Control 14, Geomagic®, Research Triangle Park, Karolina Północna, USA). Jako punkty odniesienia zostaną użyte miniśruby i struktura podniebienia

Zakładanie drutu i leczenie ortodontyczne Pacjenci będą mocowani zamkami i 0,016x0,016" Drut ze stali nierdzewnej zostanie umieszczony i podwiązany na wspornikach za pomocą gumowych pierścieni. Pacjent będzie umawiany na kolejne leczenie ortodontyczne zgodnie z terminem pobrania materiału i raz w miesiącu po zakończeniu badania.

ELISA Próbki GCF będą najpierw homogenizowane przez 30 si wirowane przez 5 min przy 1500 gw celu elucji. Elut zostanie następnie użyty jako próbka do oceny ELISA z próbek GCF. Próbka GCF zostanie wykryta jako OPG i RANKL. Racja OPG i RANKL zostanie obliczona i określi potencjał PDL do aktywacji osteoklastów.

Analiza mikroRNA Całkowity RNA zostanie wyekstrahowany z przechowywanych próbek GCF przy użyciu zestawu miRNeasy surowica/osocze (Qiagen, Valencia, CA). Ilość całkowitego RNA zostanie określona za pomocą spektrofotometru NanoDrop (Thermoscientific). Całkowity RNA zostanie poddany ilościowej reakcji RT-PCR w czasie rzeczywistym przy użyciu testów Taqman® microRNA RT-PCR specyficznych dla hsa-miR-21, -29a, b i c. hsa-let-7d, g oraz i będą używane jako kontrola wewnętrzna. Próbki od każdego pacjenta zostaną przeanalizowane przy użyciu systemu PCR w czasie rzeczywistym 7900HT (Applied Biosystems).