Karakterisering af tandkødscrevikulær væske under ortodontisk behandling

Berettigelseskriterier for opsamling af tandkødscrevikulær væske Et hundrede raske, ikke-rygende patienter i alderen 11-35 år, som har behov for ortodontisk behandling med første præmolar ekstraktion på den ortodontiske klinik ved College of Dentistry, University of Illinois i Chicago (UIC) vil være med. Det informerede samtykke vil blive præsenteret for patienter og forælder(e) [værge(r)] og underskrevet før proceduren. Patienten vil blive screenet for inklusionskriterierne på tidspunktet for samtykke. Den skriftlige tilladelse vil også blive indhentet fra mindre fag. Før behandlingen vil der blive taget periapikale røntgenbilleder af begge maxillære hjørnetænder for at verificere rodlængden og morfologien, så de præfabrikerede kraftarme på hjørnetænderne lukkes til hjørnetændernes modstandscentrum. Faste ortodontiske apparater (0,018-in; MBT-recept) vil blive placeret i emnet med en ekstra lodret spalte i de maksillære hundebeslag (Dentsply International, York, NY) for at rumme de præfabrikerede kraftarme. Forsøgspersonerne vil blive henvist til ekstraktion af de maksillære første præmolarer. En midlertidig forankringsanordning vil blive placeret mellem den maxillære anden præmolar og den maxillære første molar, 5 mm fra alveolærkammen til forankring og referenceformål. Tænderne i overkæbebuen vil blive nivelleret og justeret før hundens tilbagetrækning. En gang 0,016x0,016 rustfri stålbuetråde (Dentsply International) er placeret, vil hundens tilbagetrækning blive opnået ved hjælp af kalibrerede 70-g nikkel-titanium lukkespiralfjedre (Dentsply International) forbundet fra en midlertidig forankringsanordning til kraftarmen på hundebeslagene, der tillod applikationen af kraften tættere på tandens modstandscenter.

Opsamling af tandkødsspaltevæske Patienterne vil blive siddende i tandlægestolen i oprejst stilling. Det valgte sted vil blive lufttørret og isoleret med bomuldsruller. Uden at røre den marginale gingiva, vil supragingival plak blive fjernet for at undgå kontaminering af papirstrimlerne. De absorberende papirstrimler anbringes forsigtigt i sulcus, og de absorberede papirstrimler samles og anbringes i et sterilt Eppendorf-rør indeholdende 200 ul fosfatbuffer saltvand. Den indsamlede prøve vil blive kodet med unikke ID-numre og opbevaret ved -80C indtil analyseret. Nøglen til identifikationerne vil blive opbevaret i et aflåst skab i Rm#237B, College of Dentistry. Patienten vil blive informeret om ikke at tage NSAID men paracetamol efter tandreguleringsbehandlingen. Indsamlingen af ​​GCF vil blive udført før beslagsplacering, før hunde-retraktion, 2 uger efter hunde-retraktion, 5 uger efter hunde-retraktion og 7 uger efter hunde-retraktion.

Intraoral scanning Patienternes okklusion og kæber vil blive scannet ved hjælp af en intraoral digital scanner. Den intraorale scanning vil blive udført ved den højeste opløsning på hvert undersøgt tidspunkt. Scanningsdataene vil blive eksporteret som stereolitografisk binært filformat (.stl) og importeret til en sofistikeret behandlingssoftwarepakke (Geomagic® Control 14, Geomagic®, Research Triangle Park, NC, USA). Miniskruerne og palatal rugae-strukturen vil blive brugt som referencepunkter

Trådplacering og ortodontisk behandling Patienterne vil blive bundet med beslag og 0,016x0,016" rustfri ståltråd vil blive placeret og ligeret på beslagene med gummiringe. Patienten vil blive planlagt til at komme tilbage til den ortodontiske behandling i henhold til prøvetagningstiden og en gang om måneden efter undersøgelsen.

ELISA GCF-prøverne bliver først homogeniseret i 30 s og centrifugeret i 5 minutter ved 1500 g for at eluere. Eluen bruges derefter som en prøve til ELISA-estimering fra GCF-prøver. GCF-prøven vil blive detekteret OPG og RANKL. Rationen af ​​OPG og RANKL vil blive beregnet og bestemme potentialet af PDL til at aktivere osteoklaster.

mikroRNA-analyse Total RNA vil blive ekstraheret fra de lagrede GCF-prøver ved hjælp af miRNeasy serum/plasma-kit (Qiagen, Valencia, CA). Mængden af ​​det totale RNA vil blive bestemt ved hjælp af NanoDrop spektrofotometer (Termovidenskabelige). Det samlede RNA vil blive udsat for kvantitativ realtids-RT-PCR ved hjælp af Taqman® microRNA RT-PCR-assays, der er specifikke for hsa-miR-21, -29a, b og c. hsa-let-7d, g og i vil blive brugt som en intern kontrol. Prøverne fra hvert individ vil blive analyseret ved hjælp af et 7900HT realtime PCR-system (Applied Biosystems).