Caratterizzazione del fluido crevicolare gengivale durante il trattamento ortodontico

Criteri di ammissibilità per la raccolta del liquido crevicolare gengivale Cento pazienti sani non fumatori di età compresa tra 11 e 35 anni che necessitano di trattamento ortodontico con estrazione del primo premolare presso la clinica ortodontica del College of Dentistry, l'Università dell'Illinois a Chicago (UIC) essere incluso. Il consenso informato sarà presentato ai pazienti e ai genitori [tutori legali] e firmato prima della procedura. Il paziente verrà sottoposto a screening per i criteri di inclusione al momento del consenso. L'assenso scritto sarà ottenuto anche dai soggetti minori. Prima del trattamento verranno eseguite radiografie periapicali su entrambi i canini mascellari per verificare la lunghezza e la morfologia della radice in modo che i bracci di potenza prefabbricati sugli attacchi canini siano chiusi al centro di resistenza dei canini. Gli apparecchi ortodontici fissi (0,018 pollici; prescrizione MBT) saranno posizionati nel soggetto con una fessura verticale ausiliaria nelle staffe canine mascellari (Dentsply International, York, NY) per accogliere i bracci di potenza prefabbricati. I soggetti saranno indirizzati all'estrazione dei primi premolari mascellari. Un dispositivo di ancoraggio temporaneo verrà posizionato tra il secondo premolare mascellare e il primo molare mascellare, a 5 mm dalla cresta alveolare per scopi di ancoraggio e riferimento. I denti nell'arcata mascellare saranno livellati e allineati prima della retrazione canina. Una volta 0.016x0.016 vengono posizionati gli archi in acciaio inossidabile (Dentsply International), la retrazione canina sarà ottenuta utilizzando molle elicoidali di chiusura in nichel-titanio calibrate da 70 g (Dentsply International) collegate da un dispositivo di ancoraggio temporaneo al braccio di potenza sugli attacchi canini che hanno consentito l'applicazione della forza più vicino al centro di resistenza del dente.

Raccolta di fluido crevicolare gengivale I pazienti saranno seduti sulla poltrona del dentista in posizione eretta. Il sito selezionato sarà essiccato all'aria e isolato con rulli di cotone. Senza toccare la gengiva marginale, la placca sopragengivale verrà rimossa per evitare la contaminazione delle strisce di carta. Le strisce di carta assorbente verranno posizionate delicatamente nel solco e le strisce di carta assorbite verranno raggruppate e poste in una provetta Eppendorf sterile contenente 200 ul di tampone fosfato salino. Il campione raccolto sarà codificato con numeri ID univoci e conservato a -80°C fino al momento dell'analisi. La chiave per le identificazioni sarà conservata in un armadietto chiuso a chiave in Rm#237B, Facoltà di Odontoiatria. Il paziente verrà informato di non assumere FANS ma paracetamolo dopo il trattamento ortodontico. La raccolta di GCF verrà eseguita prima del posizionamento del bracket, prima della retrazione canina, 2 settimane dopo la retrazione canina, 5 settimane dopo la retrazione canina e 7 settimane dopo la retrazione canina.

Scansione intraorale L'occlusione e le mascelle dei pazienti verranno scansionate utilizzando uno scanner digitale intraorale. La scansione intraorale verrà eseguita alla massima risoluzione in ogni timepoint studiato. I dati di scansione verranno esportati come formato di file binario di stereolitografia (.stl) e importati in un sofisticato pacchetto software di elaborazione (Geomagic® Control 14, Geomagic®, Research Triangle Park, NC, USA). Le miniviti e la struttura delle rughe palatali saranno utilizzate come punti di riferimento

Posizionamento del filo e trattamento ortodontico I pazienti saranno legati con staffe e 0.016x0.016" filo di acciaio inossidabile sarà posizionato e legato sulle staffe con anelli di gomma. Il paziente verrà programmato per tornare per il trattamento ortodontico in base all'orario di raccolta del campione e una volta al mese dopo lo studio.

ELISA I campioni GCF saranno prima omogeneizzati per 30 s e centrifugati per 5 min a 1500 g per eluire. L'eluito verrà quindi utilizzato come campione per la stima ELISA da campioni GCF. Il campione GCF verrà rilevato OPG e RANKL. Il rapporto tra OPG e RANKL sarà calcolato e determinerà il potenziale del PDL di attivare gli osteoclasti.

Analisi del microRNA L'RNA totale sarà estratto dai campioni di GCF conservati utilizzando il kit miRNeasy siero/plasma (Qiagen, Valencia, CA). La quantità dell'RNA totale sarà determinata mediante spettrofotometro NanoDrop (Thermoscientific). L'RNA totale sarà sottoposto a RT-PCR quantitativa in tempo reale utilizzando saggi Taqman® microRNA RT-PCR specifici per hsa-miR-21, -29a, b e c. hsa-let-7d, g e i saranno usati come controllo interno. I campioni di ciascun soggetto saranno analizzati utilizzando un sistema PCR realtime 7900HT (Applied Biosystems).