Gingival Crevicular Fluid jellemzése fogszabályozó kezelés során

Alkalmassági kritériumok a fogíny-revicularis folyadék gyűjtésére Száz egészséges, nemdohányzó, 11-35 év közötti, fogszabályozási kezelésre szoruló, első premoláris extrakciót igénylő beteg fogszabályozó klinikáján, a College of Dentistry, az Illinois-i Egyetem (UIC) fogszabályzós klinikáján. szerepeljenek. A tájékoztatáson alapuló beleegyezést bemutatják a betegeknek és a szülő(k)nek [törvényes gyám(ok)], és aláírják az eljárás előtt. A beleegyezés időpontjában a beteget átvizsgálják a felvételi kritériumok szempontjából. Az írásbeli hozzájárulást melléktárgyakból is meg kell szerezni. A kezelés előtt mindkét maxilláris szemfogról periapikális röntgenfelvételt készítenek a gyökér hosszának és morfológiájának ellenőrzésére, így a szemfogak előre gyártott erőkarjai záródnak a szemfogak ellenállási középpontjához. Rögzített fogszabályzó készülékeket (0,018 hüvelyk; MBT recept) helyeznek el az alanyban egy függőleges segédnyílással a maxilláris szemfogakba (Dentsply International, York, NY) az előre gyártott erőkarok elhelyezésére. Az alanyokat a maxilláris első premolárisok kihúzására utalják. Egy ideiglenes rögzítőeszközt kell elhelyezni a felső felső nagyőrlőfog és az első nagyőrlőfog között, 5 mm-re az alveoláris taréjtól rögzítési és referencia célból. A szemfogak visszahúzása előtt a maxilláris ívben lévő fogak szintbe kerülnek és egy vonalba kerülnek. Egyszer 0,016x0,016 rozsdamentes acél ívhuzalok (Dentsply International) vannak elhelyezve, a szemfogak visszahúzása kalibrált, 70 g-os nikkel-titán záró-tekercses rugók (Dentsply International) segítségével történik, amelyeket egy ideiglenes rögzítőeszközről csatlakoztatnak az alkalmazást lehetővé tevő szemfogtartókon lévő erőkarhoz. a fog ellenállási középpontjához közelebb eső erő.

A fogíny résfolyadékának gyűjtése A betegeket függőleges helyzetben kell a fogorvosi székben ültetni. A kiválasztott helyet levegőn szárítjuk és pamuttekercsekkel izoláljuk. A marginális gingiva érintése nélkül a szupragingivális plakk eltávolításra kerül, hogy elkerüljük a papírcsíkok szennyeződését. Az abszorbens papírcsíkokat óvatosan helyezzük a barázdába, és az abszorbeált papírcsíkokat egyesítjük, és egy steril Eppendorf-csőbe helyezzük, amely 200 ul foszfát-puffer sóoldatot tartalmaz. Az összegyűjtött mintát egyedi azonosító számokkal kódolják, és -80 C-on tartják az elemzésig. Az azonosítók kulcsát a Fogorvosi Főiskola Rm#237B zárt szekrényében tárolják. A fogszabályozási kezelés után a pácienst tájékoztatni kell arról, hogy ne NSAID-t, hanem paracetamolt vegyen be. A GCF gyűjtése a zárójel elhelyezése előtt, a kutya visszahúzása előtt, 2 héttel a kutya behúzása után, 5 héttel a kutya visszahúzása után és 7 héttel a kutya visszahúzása után történik.

Intraorális szkenner A betegek okklúzióját és állkapcsát intraorális digitális szkenner segítségével vizsgálják. Az intraorális szkennelés minden vizsgált időpontban a legmagasabb felbontással történik. A szkennelési adatokat sztereolitográfiai bináris fájlformátumként (.stl) exportálják, és egy kifinomult feldolgozó szoftvercsomagba importálják (Geomagic® Control 14, Geomagic®, Research Triangle Park, NC, USA). A minicsavarokat és a palatális rugae szerkezetet referenciapontként fogják használni

Drótfelhelyezés és fogszabályozási kezelés A pácienseket konzolokkal és 0,016x0,016" rozsdamentes acélhuzal kerül elhelyezésre és gumigyűrűkkel ráköthető a tartókra. A pácienst a mintavételi időnek megfelelően és a vizsgálatot követően havonta egy alkalommal tervezzük visszajönni fogszabályozó kezelésre.

ELISA A GCF-mintákat először 30 másodpercig homogenizáljuk, majd 5 percig centrifugáljuk 1500 g-vel az eluáláshoz. Az eluátumot ezután mintaként használják fel a GCF-minták ELISA-becsléséhez. A GCF mintát OPG és RANKL észleli. Az OPG és a RANKL arányát kiszámítják, és meghatározzák a PDL osteoclastok aktiválási potenciálját.

mikroRNS-elemzés A tárolt GCF-mintákból a teljes RNS-t miRNeasy szérum/plazma kit (Qiagen, Valencia, CA) segítségével vonják ki. A teljes RNS mennyiségét NanoDrop spektrofotométerrel (Thermoscientific) határozzuk meg. A teljes RNS-t kvantitatív valós idejű RT-PCR-nek vetjük alá a hsa-miR-21, -29a, b és c-re specifikus Taqman® microRNS RT-PCR vizsgálati eljárásokkal. A hsa-let-7d, g és i belső vezérlőként lesznek használva. Az egyes alanyokból származó mintákat 7900HT valós idejű PCR rendszerrel (Applied Biosystems) elemzik.