Caracterización del fluido crevicular gingival durante el tratamiento de ortodoncia

Criterios de elegibilidad para la recolección de líquido crevicular gingival Cien pacientes sanos, no fumadores, de 11 a 35 años de edad que requieran tratamiento de ortodoncia con extracción de primeros premolares en la clínica de ortodoncia de la Facultad de Odontología de la Universidad de Illinois en Chicago (UIC) ser incluido. El consentimiento informado se presentará a los pacientes y a los padres [tutor(es) legal(es)] y se firmará antes del procedimiento. El paciente será examinado para los criterios de inclusión en el momento del consentimiento. El asentimiento por escrito se obtendrá también de los sujetos menores. Previo al tratamiento se tomarán radiografías periapicales de ambos caninos maxilares para verificar la longitud y morfología de la raíz de manera que los brazos de fuerza prefabricados en los brackets de caninos queden cerrados al centro de resistencia de los caninos. Se colocarán aparatos de ortodoncia fijos (prescripción MBT de 0,018 pulgadas) en el sujeto con una ranura vertical auxiliar en los soportes del canino maxilar (Dentsply International, York, NY) para acomodar los brazos eléctricos prefabricados. Los sujetos serán referidos para la extracción de los primeros premolares maxilares. Se colocará un dispositivo de anclaje temporal entre el segundo premolar superior y el primer molar superior, a 5 mm de la cresta alveolar con fines de anclaje y referencia. Los dientes del arco maxilar se nivelarán y alinearán antes de la retracción canina. Una vez 0.016x0.016 Se colocan arcos de acero inoxidable (Dentsply International), la retracción canina se logrará utilizando resortes helicoidales de cierre de níquel-titanio calibrados de 70 g (Dentsply International) conectados desde un dispositivo de anclaje temporal al brazo de potencia en los brackets caninos que permitieron la aplicación de la fuerza más cerca del centro de resistencia del diente.

Recolección de líquido crevicular gingival Los pacientes se sentarán en el sillón dental en posición vertical. El sitio seleccionado se secará al aire y se aislará con rollos de algodón. Sin tocar la encía marginal, se eliminará la placa supragingival para evitar la contaminación de las tiras de papel. Las tiras de papel absorbente se colocarán suavemente en el surco y las tiras de papel absorbidas se combinarán y se colocarán en un tubo Eppendorf estéril que contiene 200 ul de solución salina tamponada con fosfato. La muestra recolectada se codificará con números de identificación únicos y se mantendrá a -80 °C hasta que se analice. La llave para las identificaciones se guardará en un gabinete cerrado con llave en el Salón #237B, Facultad de Odontología. Se informará al paciente que no tome AINE sino paracetamol después del tratamiento de ortodoncia. La recolección de GCF se realizará antes de la colocación del bracket, antes de la retracción canina, 2 semanas después de la retracción canina, 5 semanas después de la retracción canina y 7 semanas después de la retracción canina.

Escaneo intraoral La oclusión y los maxilares de los pacientes se escanearán con un escáner digital intraoral. El escaneo intraoral se realizará a la resolución más alta en cada punto de tiempo estudiado. Los datos de escaneo se exportarán como formato de archivo binario de estereolitografía (.stl) y se importarán a un paquete de software de procesamiento sofisticado (Geomagic® Control 14, Geomagic®, Research Triangle Park, NC, EE. UU.). Los minitornillos y la estructura de las rugosidades palatinas se utilizarán como puntos de referencia.

Colocación de alambre y tratamiento de ortodoncia Los pacientes serán cementados con brackets y 0.016x0.016" Se colocará alambre de acero inoxidable y se ligará a los brackets con anillos de goma. Se programará el regreso del paciente para el tratamiento de ortodoncia de acuerdo a la hora de recolección de la muestra y una vez al mes después del estudio.

ELISA Las muestras de GCF primero se homogeneizarán durante 30 s y se centrifugarán durante 5 min a 1500 g para eluir. El eluido se usará luego como muestra para la estimación ELISA a partir de muestras GCF. La muestra GCF se detectará OPG y RANKL. Se calculará la proporción de OPG y RANKL y se determinará el potencial de PDL para activar los osteoclastos.

Análisis de microARN El ARN total se extraerá de las muestras de GCF almacenadas utilizando el kit de suero/plasma miRNeasy (Qiagen, Valencia, CA). La cantidad del ARN total se determinará mediante un espectrofotómetro NanoDrop (Thermoscientific). El ARN total se someterá a una RT-PCR cuantitativa en tiempo real utilizando ensayos Taqman® microRNA RT-PCR específicos para hsa-miR-21, -29a, b y c. hsa-let-7d, g e i se utilizarán como control interno. Las muestras de cada sujeto se analizarán utilizando un sistema de PCR en tiempo real 7900HT (Applied Biosystems).