Invasiivisen keuhkojen aspergilloosin ei-invasiivinen diagnoosi käyttämällä biomarkkereita uloshengitetyn hengityksen kondensaatissa (NIPA)

Tausta:

Biomarkkerien etsintä PA-diagnoosin parantamiseksi ja parantamiseksi jatkuu, ja se keskittyy pääasiassa verestä ja bronkoalveolaaristen huuhtelunesteiden (BAL) nesteistä havaittuihin markkereihin. Tässä tutkimuksessa tutkijat tutkivat, onko uloshengitetyn hengityksen kondensaatti hyödyllinen lähde PA:n diagnosoinnissa joko olemassa olevin menetelmin (esim. Aspergillus-DNA:n polymeraasiketjureaktion (PCR) havaitseminen) tai proteomin analyysillä. Aspergilluksen DNA:ta ei kuitenkaan ole koskaan otettu EBC:ssä ennen. Tässä pilottitutkimuksessa tutkijat selvittävät, onko mahdollista puhdistaa DNA:ta pneumocystis-keuhkotulehduksesta potilailla, joilla on todettu pneumocystis-keuhkokuume sekä siksi, että pneumocystis-keuhkokuumeen diagnostinen testi on herkempi ja spesifisempi, että myös siksi, että pneumocystis-keuhkokuume on yleisempi. kuin PA. Tutkijat säästävät EBC-näytteet potilailta PA proteiinianalyysiä varten tässä tutkimuksessa.

Aiemmissa tutkimuksissa ei ole tutkittu EBC-proteiinianalyysin mahdollisuuksia diagnostisena työkaluna PA-infektioissa. Tässä pilottitutkimuksessa tutkijat testaavat, onko Aspergillus-proteiineja läsnä EBC:ssä potilailta, joilla on todistettu/todennäköinen/mahdollinen PA.

Menetelmät:

Tutkimuksessa verrataan uloshengityshengityskondensaatin (EBC) proteiiniprofiileja, jotka on kerätty potilailta, joilla on todettu, todennäköinen tai mahdollinen keuhkoaspergillus (PA) -infektio, ja potilailta, joilla epäillään PA-infektiota, kun rutiinidiagnostinen työ sulki pois PA:n, sekä negatiivisista kontrolleista eli potilaista, jotka hematologian osastolta, infektiotautiosastolta, hengityselinsairauksien osastolta ja sydän- ja rintakehäkirurgian poliklinikalta saman iän (10 vuoden sisällä) ja sukupuolen kanssa diagnostinen hoito hyvänlaatuisten/indolenttien tilojen varalta ja ilman epäiltyä PA:ta Aalborgin yliopistollinen sairaala. Päätulosta, eli spesifisten proteiinien suhteellisten määrien keskiarvoa EBC-näytteissä, verrataan parittomilla t-testeillä sen jälkeen, kun on arvioitu näiden kahden ryhmän normaaliolot ja standardipoikkeamat seuraavissa vertailuissa: todistettu/todennäköinen/mahdollinen PA vs. potilaat, joiden PA oli poissuljettu ja todistettu/todennäköinen/mahdollinen PA vs. negatiiviset kontrollit. Jos verrataan kolmea ryhmää, käytetään yksisuuntaista varianssianalyysiä, mutta tämä ei kuulu tutkimuksemme pääalueeseen.

Alatutkimuksessa tutkijat keräävät EBC:t potilailta, joilla epäillään Pneumocystis jirovecii -keuhkokuumetta, ja terveiltä kontrolleilta eli potilailta, joille tehdään diagnostinen hoito hyvänlaatuisten/laittomien sairauksien varalta ja joilla ei ole epäilystä pneumocystis-keuhkokuumeesta. Pneumocystis-keuhkokuumeen diagnostiset testit ovat erittäin spesifisiä ja herkkiä. Tutkijat testaavat, onko pneumokystis-DNA havaittavissa näiden potilaiden EBC:ssä, ja oppivat, kuinka DNA tulisi erottaa EBC-näytteistä. DNA:n uutto ja analyysi tehdään paikallisesti. Tutkijat käyttävät tämän osatutkimuksen kokemuksia ja tuloksia suunniteltaessa lisätutkimuksia Aspergilluksen havaitsemisesta EBC:ssä tämän pilottitutkimuksen jälkeen, jos aiheellista. Tutkijoihin kuuluu neljä potilasta, joilla on vahvistettu pneumocystis-keuhkokuume, ja neljä tervettä kontrollia. Suun huuhteluvesien pneumocystis-testit kerätään välittömästi ennen EBC:n keräämistä sekä tapauksista että terveistä kontrolleista. Jos pneumocystis-keuhkokuumeen diagnoosia ei vahvisteta potilaalla, jolla on epäilty pneumocystis-keuhkokuume, potilas otetaan mukaan negatiiviseksi kontrolliksi.

Verinäytteet (esim. Ylimääräinen plasma/seerumi rutiininomaisista verinäytteistä, jotka on otettu osana rutiinidiagnostista työtä) tutkimuksen osallistujilta (sekä PA-potilaat, terveet kontrollit ja pneumocystis-keuhkokuumepotilaat) varastoidaan standardointia ja todentamista sekä mahdollisten löydösten täydennysanalyysiä varten. EBC:ssä. Plasma on se osa verinäytteestä, joka jää jäljelle sentrifugoinnin jälkeen, kun verinäytteen ottamisen yhteydessä lisätään antikoagulanttia. Tästä syystä joidenkin näytteiden (sitraatti, etyleenidiamiinitetraetikkahappo (EDTA), hepariinilla päällystetyt putket) osalta tutkijat varastoivat plasmaa (ts. soluton osa verestä, jossa on hyytymistekijöitä) ja putkessa hyytymään saaneen verinäytteen varastoitu materiaali on seerumia (ts. soluton osa verestä ilman hyytymistekijöitä). Sopivimpien markkerien ja substraattien hyväksymiseksi standardointia varten EBC-näytteiden analyysi on saatava päätökseen ennen kuin verinäytteet voidaan analysoida. Vain biokemiallinen, ei geneettistä analyysiä. Terveiden PA-kontrollien osalta tutkijat pyytävät ylimääräistä verinäytettä aspergillus galaktomannaanin havaitsemiseksi. Terveille pneumocystis-keuhkokuumekontrolleille tutkijat pyytävät pneumocystis-suunpesua pneumocystis-testiä varten.