Nieinwazyjna diagnostyka inwazyjnej aspergilozy płucnej za pomocą biomarkerów w kondensacie wydychanego powietrza (NIPA)

Tło:

Trwają poszukiwania biomarkerów, które wzmocnią i poprawią diagnostykę PA, koncentrując się głównie na markerach wykrywanych we krwi i płynach z popłuczyn oskrzelowo-pęcherzykowych (BAL). W tym badaniu badacze zbadają, czy kondensat wydychanego powietrza jest użytecznym źródłem do diagnozy PA za pomocą istniejących metod (tj. reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) wykrywanie DNA Aspergillus) lub przez analizę proteomu. Jednak nigdy wcześniej w EBC nie przeprowadzano ekstrakcji DNA Aspergillus. W tym badaniu pilotażowym badacze zbadają, czy możliwe jest oczyszczenie DNA z pneumocystis z EBC pacjentów z potwierdzonym zapaleniem płuc spowodowanym przez pneumocystis zarówno ze względu na większą czułość i swoistość testu diagnostycznego na zapalenie płuc wywołane przez pneumocystis, jak i ze względu na fakt, że zapalenie płuc wywołane przez pneumocystis występuje częściej niż PA. Badacze oszczędzą próbki EBC od pacjentów z PA do analizy białek w tym badaniu.

Żadne wcześniejsze badania nie badały potencjału analizy białek EBC jako narzędzia diagnostycznego w zakażeniach PA. W tym badaniu pilotażowym badacze sprawdzą, czy białka Aspergillus są obecne w EBC pacjentów z potwierdzonym/prawdopodobnym/możliwym PA.

Metody:

W badaniu porównane zostaną profile białkowe kondensatu wydychanego powietrza (EBC) pobranego od pacjentów z potwierdzonym, prawdopodobnym lub możliwym zakażeniem aspergillus płuc (PA) oraz pacjentów z podejrzeniem zakażenia PA, u których rutynowa diagnostyka wykluczyła PA, z kontrolą negatywną, tj. poddać się diagnostyce w kierunku stanów łagodnych/indolentnych i bez podejrzenia PA, w tym samym wieku (w przedziale 10 lat) i płci z poradni hematologicznej, oddziału chorób zakaźnych, oddziału chorób układu oddechowego i oddziału kardiochirurgii przy ul. Szpital Uniwersytecki w Aalborgu. Główny wynik, tj. średnie względnych ilości określonych białek w próbkach EBC, zostanie porównany za pomocą niesparowanych testów t po ocenie normalności i odchyleń standardowych w obrębie dwóch grup w następujących porównaniach: udowodnione/prawdopodobne/możliwe PA vs. pacjenci, u których wykluczono PA i potwierdzono/prawdopodobne/możliwe PA w porównaniu z kontrolą negatywną. W przypadku porównania trzech grup zostanie zastosowana jednokierunkowa analiza wariancji, ale nie jest to głównym przedmiotem naszych badań.

W badaniu cząstkowym badacze będą zbierać EBC od pacjentów z podejrzeniem zapalenia płuc wywołanego przez Pneumocystis jirovecii oraz zdrowych osób z grupy kontrolnej, tj. Testy diagnostyczne w kierunku zapalenia płuc wywołanego przez pneumocystis są wysoce swoiste i czułe. Badacze sprawdzą, czy DNA pneumocystis jest wykrywalne w EBC od tych pacjentów i dowiedzą się, w jaki sposób należy ekstrahować DNA z próbek EBC. Ekstrakcja i analiza DNA zostaną przeprowadzone lokalnie. Badacze wykorzystają doświadczenia i wyniki tego badania cząstkowego do zaprojektowania dalszych badań wykrywania Aspergillus w EBC po tym badaniu pilotażowym, jeśli będzie to właściwe. Badacze obejmą czterech pacjentów z potwierdzonym zapaleniem płuc wywołanym przez pneumocystozę i czterech zdrowych osób z grupy kontrolnej. Testy na obecność pneumocystis w popłuczynach jamy ustnej będą pobierane bezpośrednio przed pobraniem EBC zarówno dla przypadków, jak i zdrowych kontroli. Jeżeli rozpoznanie zapalenia płuc wywołanego przez Pneumocystis nie zostanie potwierdzone u pacjenta z podejrzeniem zapalenia płuc wywołanego przez Pneumocystis, pacjent zostanie włączony jako kontrola negatywna.

Próbki krwi (tj. nadmiar osocza/surowicy z rutynowych próbek krwi pobranych w ramach rutynowej diagnostyki) od uczestników badania (zarówno pacjentów z PA, zdrowych osób z grupy kontrolnej, jak i pacjentów z zapaleniem płuc wywołanym przez Pneumocystis) będzie przechowywany w celu standaryzacji i weryfikacji oraz uzupełniającej analizy ewentualnych wyników w EBC. Osocze to część próbki krwi, która pozostaje po odwirowaniu, gdy po pobraniu próbki krwi dodaje się środek przeciwkrzepliwy. Dlatego w przypadku niektórych próbek (cytrynian, kwas etylenodiaminotetraoctowy (EDTA), probówki powlekane heparyną) badacze będą przechowywać osocze (tj. wolna od komórek część krwi z czynnikami krzepnięcia), a dla próbki krwi, której pozwolono na skoagulowanie w probówce, przechowywanym materiałem będzie surowica (tj. bezkomórkowa część krwi bez czynników krzepnięcia). W celu zakwalifikowania najbardziej odpowiednich markerów i substratów do standaryzacji, analiza próbek EBC musi zostać zakończona przed analizą próbek krwi. Zostanie przeprowadzona tylko analiza biochemiczna, nie zostanie przeprowadzona żadna analiza genetyczna. W przypadku zdrowych kontroli PA badacze poproszą o dodatkową próbkę krwi w celu wykrycia galaktomannanu z kropidlaka. W przypadku zdrowej grupy kontrolnej z zapaleniem płuc wywołanym przez Pneumocystis, badacze poproszą o płyn do płukania jamy ustnej w celu wykonania testu na Pneumocystis.