Diagnostic non invasif de l'aspergillose pulmonaire invasive par l'utilisation de biomarqueurs dans le condensat expiré (NIPA)

Fond:

La recherche de biomarqueurs pour améliorer et améliorer le diagnostic de l'AP est en cours, principalement axée sur les marqueurs détectés dans le sang et les liquides de lavage bronchoalvéolaire (BAL). Dans cette étude, les chercheurs étudieront si le condensat expiré est une source utile pour le diagnostic de l'AP soit par les méthodes existantes (c.-à-d. détection par réaction en chaîne par polymérase (PCR) de l'ADN d'Aspergillus) ou par analyse du protéome. Cependant, l'extraction de l'ADN d'Aspergillus n'a jamais été effectuée dans l'EBC auparavant. Dans cette étude pilote, les chercheurs étudieront s'il est possible de purifier l'ADN de pneumocystis à partir d'EBC de patients atteints de pneumonie à pneumocystis prouvée, à la fois parce que le test de diagnostic de la pneumonie à pneumocystis est plus sensible et spécifique et également en raison du fait que la pneumonie à pneumocystis est plus fréquente que PA. Les enquêteurs épargneront les échantillons EBC des patients PA pour l'analyse des protéines dans cette étude.

Aucune étude antérieure n'a étudié le potentiel de l'analyse des protéines EBC comme outil de diagnostic dans les infections à PA. Dans cette étude pilote, les chercheurs testeront si les protéines d'Aspergillus sont présentes dans l'EBC de patients atteints d'AP avérée/probable/possible.

Méthodes :

L'étude comparera les profils protéiques du condensat expiré (EBC) recueilli auprès de patients atteints d'une infection pulmonaire à aspergillus (AP) avérée, probable ou possible et de patients suspects d'infection à AP pour lesquels le bilan diagnostique de routine a exclu l'AP, et les témoins négatifs, c'est-à-dire les patients qui subir un bilan diagnostique pour des conditions bénignes / indolentes et sans suspicion d'AP, avec le même âge (dans une fourchette de 10 ans) et le sexe de la clinique externe du département d'hématologie, du département des maladies infectieuses, du département des maladies respiratoires et du département de chirurgie cardiothoracique à Hôpital universitaire d'Aalborg. Le résultat principal, c'est-à-dire les moyennes des quantités relatives de protéines spécifiques dans les échantillons EBC, sera comparé par des tests t non appariés après évaluation de la normalité et des écarts-types au sein des deux groupes dans les comparaisons suivantes : prouvé/probable/possible PA vs .patients pour lesquels l'AP a été exclue et l'AP prouvée/probable/possible par rapport aux témoins négatifs. Dans le cas où trois groupes sont comparés, l'analyse de variance à un facteur sera appliquée, mais cela n'entre pas dans le cadre principal de notre étude.

Dans une sous-étude, les chercheurs recueilleront l'EBC de patients suspects de pneumonie à Pneumocystis jirovecii et de témoins sains, c'est-à-dire des patients qui subissent un bilan diagnostique pour des affections bénignes/indolentes et sans suspicion de pneumonie à pneumocystis. Les tests de diagnostic de la pneumonie à pneumocystis sont très spécifiques et sensibles. Les enquêteurs testeront si l'ADN de pneumocystis est détectable dans l'EBC de ces patients et apprendront comment l'ADN doit être extrait des échantillons d'EBC. L'extraction et l'analyse de l'ADN seront effectuées localement. Les enquêteurs utiliseront les expériences et les résultats de cette sous-étude dans la conception d'autres études de détection d'Aspergillus dans l'EBC après cette étude pilote, le cas échéant. Les enquêteurs comprendront quatre patients atteints de pneumonie à pneumocystis confirmée et quatre témoins sains. Les tests de pneumocystose par lavage oral seront collectés immédiatement avant la collecte de l'EBC pour les cas et les témoins sains. Si le diagnostic de pneumonie à pneumocystis n'est pas confirmé chez un patient suspecté de pneumonie à pneumocystis, le patient sera inclus comme témoin négatif.

Des échantillons de sang (c.-à-d. l'excès de plasma/sérum provenant d'échantillons sanguins de routine prélevés dans le cadre d'un bilan diagnostique de routine) des participants à l'étude (patients PA, témoins sains et patients atteints de pneumonie à pneumocystis) sera stocké à des fins de normalisation, de vérification et d'analyse complémentaire des résultats possibles dans l'EBC. Le plasma est la partie d'un échantillon de sang qui reste après la centrifugation lorsqu'un agent anticoagulant est ajouté lors du prélèvement de l'échantillon de sang. Ainsi, pour certains des échantillons (citrate, acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA), tubes revêtus d'héparine), les enquêteurs stockeront du plasma (c.-à-d. partie exempte de cellules du sang contenant des facteurs de coagulation) et pour l'échantillon de sang qui a pu coaguler dans le tube, le matériel stocké sera du sérum (c'est-à-dire partie acellulaire du sang sans facteurs de coagulation). Afin de qualifier les marqueurs et les substrats les plus appropriés pour la standardisation, l'analyse des échantillons EBC doit être terminée avant que les échantillons de sang puissent être analysés. Uniquement biochimique, aucune analyse génétique ne sera effectuée. Pour les contrôles PA sains, les enquêteurs demanderont un échantillon de sang supplémentaire pour la détection d'aspergillus galactomannane. Pour les témoins sains de pneumonie à pneumocystis, les enquêteurs demanderont un lavage buccal de pneumocystis pour le test de pneumocystis.