Неинвазивная диагностика инвазивного аспергиллеза легких с использованием биомаркеров в конденсате выдыхаемого воздуха (NIPA)

Задний план:

Продолжается поиск биомаркеров для расширения и улучшения диагностики ПА, в основном сосредоточенный на маркерах, обнаруживаемых в крови и жидкостях бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ). В этом исследовании исследователи изучат, является ли конденсат выдыхаемого воздуха полезным источником для диагностики ПА либо с помощью существующих методов (т.е. полимеразной цепной реакцией (ПЦР) обнаружение ДНК Aspergillus) или путем анализа протеома. Однако экстракция ДНК Aspergillus никогда ранее не проводилась в EBC. В этом пилотном исследовании исследователи изучат, возможно ли очистить ДНК пневмоцисты от EBC пациентов с подтвержденной пневмоцистной пневмонией как потому, что диагностический тест на пневмоцистную пневмонию более чувствителен и специфичен, так и из-за того, что пневмоцистная пневмония более распространена. чем ПА. Исследователи сохранят образцы EBC от пациентов PA для анализа белка в этом исследовании.

Ни в одном из предыдущих исследований не изучался потенциал анализа белка EBC в качестве диагностического инструмента при инфекциях PA. В этом пилотном исследовании исследователи проверят, присутствуют ли белки Aspergillus в EBC у пациентов с доказанной/вероятной/возможной ПА.

Методы:

В исследовании будут сравниваться белковые профили конденсата выдыхаемого воздуха (КВВ), собранного у пациентов с доказанной, вероятной или возможной инфекцией легочного аспергиллеза (ЛА) и пациентов с подозрением на инфекцию ЛА, у которых рутинная диагностика исключила ЛА, и с отрицательным контролем, т.е. пройти диагностическое обследование по поводу доброкачественных/вялотекущих состояний и без подозрения на ПА, с одинаковым возрастом (в пределах 10 лет) и пола в амбулаторно-поликлиническом отделении гематологии, инфекционного отделения, отделения болезней органов дыхания и отделения кардиоторакальной хирургии Больница Ольборгского университета. Основной результат, то есть средние относительные количества специфических белков в образцах EBC, будет сравниваться с помощью непарных t-тестов после оценки нормальности и стандартных отклонений в двух группах в следующих сравнениях: доказанная/вероятная/возможная PA vs. y пациенты с исключенным ПА и подтвержденным/вероятным/возможным ПА по сравнению с отрицательным контролем. В случае сравнения трех групп будет применяться однофакторный дисперсионный анализ, но это не входит в основной объем нашего исследования.

В рамках дополнительного исследования исследователи будут собирать EBC у пациентов с подозрением на пневмоцистную пневмонию Pneumocystis jirovecii и у здоровых лиц, то есть у пациентов, которые проходят диагностическое обследование по поводу доброкачественных/индолентных состояний и без подозрения на пневмоцистную пневмонию. Диагностические тесты на пневмоцистную пневмонию высокоспецифичны и чувствительны. Исследователи проверят, обнаруживается ли ДНК пневмоцисты в EBC этих пациентов, и узнают, как ДНК следует извлекать из образцов EBC. Извлечение ДНК и анализ будут проводиться на месте. Исследователи будут использовать опыт и результаты этого вспомогательного исследования при разработке дальнейших исследований по обнаружению Aspergillus в EBC после этого пилотного исследования, если это уместно. Исследователи будут включать четырех пациентов с подтвержденной пневмоцистной пневмонией и четырех здоровых людей из контрольной группы. Анализы смывов полости рта на пневмоцисту будут собираться непосредственно перед сбором EBC ​​как для больных, так и для здоровых людей. Если диагноз пневмоцистной пневмонии не подтвержден у пациента с подозрением на пневмоцистную пневмонию, пациент будет включен в качестве отрицательного контроля.

Образцы крови (т. избыточная плазма/сыворотка из рутинных образцов крови, взятых в рамках рутинной диагностической работы) от участников исследования (как пациентов с ПА, так и здоровых людей из контрольной группы, а также пациентов с пневмоцистной пневмонией) будет храниться для стандартизации, проверки и дополнения анализа возможных результатов. в ЕБК. Плазма — это часть образца крови, которая остается после центрифугирования при добавлении антикоагулянта при взятии образца крови. Следовательно, для некоторых образцов (цитрат, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА), пробирки, покрытые гепарином) исследователи будут хранить плазму (т. бесклеточная часть крови с факторами свертывания крови), а для образца крови, которому позволили свернуться в пробирке, хранящимся материалом будет сыворотка (т. бесклеточная часть крови без факторов свертывания крови). Чтобы квалифицировать наиболее подходящие маркеры и субстраты для стандартизации, анализ образцов EBC должен быть завершен до того, как можно будет анализировать образцы крови. Только биохимический, никакого генетического анализа проводить не будут. Для здоровых контролей PA исследователи попросят дополнительный образец крови для обнаружения галактоманнана аспергилл. Для контроля здоровой пневмоцистной пневмонии исследователи попросят промывать рот пневмоцистной жидкостью для теста на пневмоцистную инфекцию.