Diagnosi non invasiva di aspergillosi polmonare invasiva mediante l'uso di biomarcatori nel condensato del respiro esalato (NIPA)

Sfondo:

La ricerca di biomarcatori per potenziare e migliorare la diagnosi di PA è in corso, focalizzata principalmente sui marcatori rilevati nel sangue e nei fluidi di lavaggio broncoalveolare (BAL). In questo studio, i ricercatori indagheranno se il condensato del respiro esalato sia una fonte utile per la diagnosi di PA con metodi esistenti (ad es. rilevamento della reazione a catena della polimerasi (PCR) del DNA di Aspergillus) o mediante analisi del proteoma. Tuttavia, l'estrazione del DNA di Aspergillus non è mai stata effettuata prima nell'EBC. In questo studio pilota i ricercatori indagheranno se è possibile purificare il DNA da pneumocystis da EBC di pazienti con comprovata polmonite da pneumocystis sia perché il test diagnostico per la polmonite da pneumocystis è più sensibile e specifico e anche per il fatto che la polmonite da pneumocystis è più comune rispetto alla PA. Gli investigatori risparmieranno i campioni EBC dai pazienti PA per l'analisi delle proteine ​​​​in questo studio.

Nessuno studio precedente ha indagato il potenziale dell'analisi delle proteine ​​EBC come strumento diagnostico nelle infezioni PA. In questo studio pilota, i ricercatori verificheranno se le proteine ​​​​di Aspergillus sono presenti nell'EBC da pazienti con PA provata/probabile/possibile.

Metodi:

Lo studio confronterà i profili proteici del condensato del respiro esalato (EBC) raccolti da pazienti con infezione polmonare da aspergillus (PA) provata, probabile o possibile e pazienti con sospetta infezione da PA in cui l'iter diagnostico di routine ha escluso PA, e controlli negativi, cioè pazienti che sottoporsi ad accertamento diagnostico per condizioni benigne/indolenti e senza sospetta PA, con la stessa età (entro un range di 10 anni) e sesso presso l'ambulatorio del reparto di ematologia, reparto di malattie infettive, reparto di malattie respiratorie e reparto di chirurgia cardiotoracica presso Ospedale universitario di Aalborg. L'esito principale, ovvero la media delle quantità relative di proteine ​​specifiche nei campioni EBC, sarà confrontato mediante test t non appaiati dopo la valutazione della normalità e delle deviazioni standard all'interno dei due gruppi nei seguenti confronti: PA provata/probabile/possibile vs pazienti in cui è stata esclusa PA e PA provata/probabile/possibile rispetto a controlli negativi. Nel caso in cui vengano confrontati tre gruppi, verrà applicata l'analisi della varianza unidirezionale, ma questo non rientra nell'ambito principale del nostro studio.

In un sottostudio, gli investigatori raccoglieranno EBC da pazienti con sospetta polmonite da Pneumocystis jirovecii e controlli sani, cioè pazienti sottoposti a iter diagnostico per condizioni benigne/indolenti e senza sospetta polmonite da pneumocystis. I test diagnostici per la polmonite da pneumocystis sono altamente specifici e sensibili. Gli investigatori testeranno se il DNA di pneumocystis è rilevabile nell'EBC da questi pazienti e impareranno come il DNA dovrebbe essere estratto dai campioni EBC. L'estrazione e l'analisi del DNA saranno effettuate localmente. I ricercatori utilizzeranno le esperienze e i risultati di questo sottostudio nella progettazione di ulteriori studi sul rilevamento di Aspergillus nell'EBC dopo questo studio pilota, se pertinente. Gli investigatori includeranno quattro pazienti con polmonite da pneumocystis confermata e quattro controlli sani. I test di pneumocystis ai lavaggi orali saranno raccolti immediatamente prima che l'EBC venga raccolto sia per i casi che per i controlli sani. Se la diagnosi di polmonite da pneumocystis non è confermata in un paziente con sospetta polmonite da pneumocystis, il paziente verrà incluso come controllo negativo.

Campioni di sangue (es. plasma/siero in eccesso da campioni di sangue di routine prelevati come parte del lavoro diagnostico di routine) dai partecipanti allo studio (sia pazienti con PA, controlli sani e pazienti con polmonite da pneumocystis) saranno conservati per la standardizzazione e la verifica e per integrare l'analisi di possibili risultati nell'EBC. Il plasma è la parte di un campione di sangue che rimane dopo la centrifugazione quando viene aggiunto un agente anticoagulante al prelievo del campione di sangue. Quindi, per alcuni dei campioni (citrato, acido etilendiamminotetraacetico (EDTA), provette rivestite con eparina), gli investigatori conserveranno il plasma (ad es. parte priva di cellule del sangue con fattori di coagulazione) e per il campione di sangue che è stato lasciato coagulare nella provetta, il materiale conservato sarà siero (cioè parte del sangue priva di cellule senza fattori della coagulazione). Per qualificare i marcatori ei substrati più adatti per la standardizzazione, l'analisi dei campioni EBC deve essere completata prima che i campioni di sangue possano essere analizzati. Solo biochimica, non verrà condotta alcuna analisi genetica. Per i controlli PA sani, gli investigatori chiederanno un campione di sangue extra per il rilevamento dell'aspergillus galattomannano. Per i controlli sani di polmonite da pneumocystis, gli investigatori chiederanno un lavaggio orale pneumocystis per test di pneumocystis.