Nicht-invasive Diagnose der invasiven pulmonalen Aspergillose durch Verwendung von Biomarkern im Atemkondensat (NIPA)

Hintergrund:

Die Suche nach Biomarkern zur Erweiterung und Verbesserung der PA-Diagnose ist im Gange und konzentriert sich hauptsächlich auf Marker, die im Blut und in Flüssigkeiten der bronchoalveolären Lavage (BAL) nachgewiesen werden. In dieser Studie werden die Forscher untersuchen, ob Atemkondensat eine nützliche Quelle für die Diagnose von PA ist, entweder mit bestehenden Methoden (d. h. Polymerase-Kettenreaktion (PCR)-Nachweis von Aspergillus-DNA) oder durch Analyse des Proteoms. Die Extraktion von Aspergillus-DNA wurde jedoch noch nie zuvor im EBC durchgeführt. In dieser Pilotstudie werden die Forscher untersuchen, ob es möglich ist, DNA aus Pneumocystis aus EBC von Patienten mit nachgewiesener Pneumocystis-Pneumonie aufzureinigen, sowohl weil der diagnostische Test für Pneumocystis-Pneumonie sensitiver und spezifischer ist, als auch aufgrund der Tatsache, dass Pneumocystis-Pneumonie häufiger auftritt als PA. Die Ermittler werden die EBC-Proben von Patienten PA für die Proteinanalyse in dieser Studie verschonen.

Bisherige Studien haben das Potenzial der EBC-Proteinanalyse als diagnostisches Instrument bei PA-Infektionen nicht untersucht. In dieser Pilotstudie werden die Forscher testen, ob Aspergillus-Proteine ​​in den EBC von Patienten mit nachgewiesener/wahrscheinlicher/möglicher PA vorhanden sind.

Methoden:

Die Studie wird die Proteinprofile von ausgeatmetem Atemkondensat (EBC) vergleichen, das von Patienten mit nachgewiesener, wahrscheinlicher oder möglicher pulmonaler Aspergillus (PA)-Infektion und Patienten mit vermuteter PA-Infektion, bei denen eine routinemäßige diagnostische Abklärung PA ausschloss, und Negativkontrollen, d einer diagnostischen Abklärung bei benignen/indolenten Erkrankungen und ohne Verdacht auf PA, mit gleichem Alter (im Bereich von 10 Jahren) und Geschlecht aus der Ambulanz der Abteilung für Hämatologie, der Abteilung für Infektionskrankheiten, der Abteilung für Atemwegserkrankungen und der Abteilung für Herz-Thorax-Chirurgie unterzogen werden Universitätskrankenhaus Aalborg. Das Hauptergebnis, d. h. die Mittelwerte der relativen Mengen spezifischer Proteine ​​in den EBC-Proben, werden durch ungepaarte t-Tests nach Bewertung der Normalität und Standardabweichungen innerhalb der beiden Gruppen in den folgenden Vergleichen verglichen: nachgewiesene/wahrscheinliche/mögliche PA vs Patienten, bei denen PA ausgeschlossen wurde und nachgewiesene/wahrscheinliche/mögliche PA im Vergleich zu Negativkontrollen. Falls drei Gruppen verglichen werden, wird die Einweg-Varianzanalyse angewendet, aber dies ist nicht im Hauptbereich unserer Studie.

In einer Teilstudie werden die Prüfärzte EBC von Patienten mit Verdacht auf Pneumocystis-jirovecii-Pneumonie und gesunden Kontrollpersonen sammeln, d. h. Patienten, die sich einer diagnostischen Abklärung wegen gutartiger/indolenter Erkrankungen und ohne Verdacht auf Pneumocystis-Pneumonie unterziehen. Diagnostische Tests für Pneumocystis-Pneumonie sind hochspezifisch und empfindlich. Die Forscher werden testen, ob Pneumocystis-DNA in den EBC dieser Patienten nachweisbar ist, und erfahren, wie DNA aus den EBC-Proben extrahiert werden sollte. Die DNA-Extraktion und -Analyse wird vor Ort durchgeführt. Die Prüfärzte werden die Erfahrungen und Ergebnisse aus dieser Teilstudie bei der Gestaltung weiterer Studien zum Nachweis von Aspergillus im EBC nach dieser Pilotstudie verwenden, falls relevant. Die Ermittler werden vier Patienten mit bestätigter Pneumocystis-Pneumonie und vier gesunde Kontrollpersonen umfassen. Oral Wash Pneumocystis-Tests werden unmittelbar vor der EBC-Sammlung sowohl für Fälle als auch für gesunde Kontrollen gesammelt. Wenn die Diagnose einer Pneumocystis-Pneumonie bei einem Patienten mit Verdacht auf Pneumocystis-Pneumonie nicht bestätigt wird, wird der Patient als Negativkontrolle eingeschlossen.

Blutproben (d.h. überschüssiges Plasma/Serum aus routinemäßig entnommenen Blutproben im Rahmen der Routinediagnostik) der Studienteilnehmer (sowohl PA-Patienten, gesunde Kontrollen als auch Pneumocystis-Pneumonie-Patienten) werden zur Standardisierung und Verifizierung und ergänzenden Analyse möglicher Befunde aufbewahrt im EBC. Plasma ist der Teil einer Blutprobe, der nach der Zentrifugation zurückbleibt, wenn bei der Entnahme der Blutprobe ein gerinnungshemmendes Mittel hinzugefügt wird. Daher lagern die Forscher für einige der Proben (Citrat, Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), heparinbeschichtete Röhrchen) Plasma (d. h. zellfreier Teil des Blutes mit Gerinnungsfaktoren) und für die Blutprobe, die im Röhrchen gerinnen durfte, ist das gelagerte Material Serum (d. h. zellfreier Teil des Blutes ohne Gerinnungsfaktoren). Um die am besten geeigneten Marker und Substrate für die Standardisierung zu qualifizieren, muss die Analyse der EBC-Proben abgeschlossen sein, bevor die Blutproben analysiert werden können. Nur biochemisch, es werden keine genetischen Analysen durchgeführt. Für die gesunden PA-Kontrollen fordern die Ermittler eine zusätzliche Blutprobe zum Nachweis von Aspergillus Galactomannan an. Für die gesunden Pneumocystis-Pneumonie-Kontrollen werden die Ermittler um eine Pneumocystis-Mundspülung zum Test auf Pneumocystis bitten.