Diagnóstico no invasivo de aspergilosis pulmonar invasiva mediante el uso de biomarcadores en el condensado del aliento exhalado (NIPA)

Fondo:

La búsqueda de biomarcadores para potenciar y mejorar el diagnóstico de AP está en curso, principalmente enfocada en los marcadores detectados en la sangre y los fluidos del lavado broncoalveolar (BAL). En este estudio, los investigadores investigarán si el condensado del aire exhalado es una fuente útil para el diagnóstico de PA ya sea por los métodos existentes (es decir, reacción en cadena de la polimerasa (PCR) detección de ADN de Aspergillus) o por análisis del proteoma. Sin embargo, la extracción de ADN de Aspergillus nunca antes se había realizado en el EBC. En este estudio piloto, los investigadores investigarán si es posible purificar el ADN de pneumocystis de EBC de pacientes con neumonía por pneumocystis comprobada porque la prueba de diagnóstico para neumonía por pneumocystis es más sensible y específica y también por el hecho de que la neumonía por pneumocystis es más común. que PA. Los investigadores ahorrarán las muestras de EBC de los pacientes PA para el análisis de proteínas en este estudio.

Ningún estudio previo ha investigado el potencial del análisis de proteínas EBC como herramienta de diagnóstico en las infecciones por PA. En este estudio piloto, los investigadores probarán si las proteínas de Aspergillus están presentes en el EBC de pacientes con PA comprobada/probable/posible.

Métodos:

El estudio comparará los perfiles de proteínas del condensado del aliento exhalado (EBC) recolectado de pacientes con infección pulmonar por aspergillus (AP) comprobada, probable o posible y pacientes con sospecha de infección por AP donde el diagnóstico de rutina descartó AP y controles negativos, es decir, pacientes que someterse a estudio diagnóstico para condiciones benignas/indolentes y sin sospecha de PA, con la misma edad (dentro de un rango de 10 años) y sexo de la consulta externa en el departamento de hematología, departamento de enfermedades infecciosas, departamento de enfermedades respiratorias y departamento de cirugía cardiotorácica en Hospital Universitario de Aalborg. El resultado principal, es decir, las medias de las cantidades relativas de proteínas específicas en las muestras de EBC, se comparará mediante pruebas t no pareadas después de la evaluación de la normalidad y las desviaciones estándar dentro de los dos grupos en las siguientes comparaciones: PA probada/probable/posible frente a .pacientes en los que se descartó AP y AP comprobada/probable/posible vs controles negativos. En caso de que se comparen tres grupos, se aplicará el análisis de varianza de una vía, pero esto no está dentro del alcance principal de nuestro estudio.

En un subestudio, los investigadores recolectarán EBC de pacientes con sospecha de neumonía por Pneumocystis jirovecii y controles sanos, es decir, pacientes que se someten a un estudio de diagnóstico para condiciones benignas/indolentes y sin sospecha de neumonía por Pneumocystis. Las pruebas de diagnóstico para la neumonía por pneumocystis son altamente específicas y sensibles. Los investigadores probarán si el ADN de pneumocystis es detectable en el EBC de estos pacientes y aprenderán cómo se debe extraer el ADN de las muestras de EBC. La extracción y el análisis de ADN se realizarán localmente. Los investigadores utilizarán las experiencias y los resultados de este subestudio en el diseño de estudios adicionales de detección de Aspergillus en el EBC después de este estudio piloto, si corresponde. Los investigadores incluirán cuatro pacientes con neumonía pneumocystis confirmada y cuatro controles sanos. Las pruebas de pneumocystis en lavados orales se recolectarán inmediatamente antes de recolectar el EBC tanto para casos como para controles sanos. Si el diagnóstico de neumonía por Pneumocystis no se confirma en un paciente con sospecha de neumonía por Pneumocystis, el paciente se incluirá como control negativo.

Muestras de sangre (es decir, el exceso de plasma/suero de las muestras de sangre de rutina extraídas como parte del trabajo de diagnóstico de rutina) de los participantes del estudio (pacientes con PA, controles sanos y pacientes con neumonía por pneumocystis) se almacenará para su estandarización, verificación y análisis complementario de posibles hallazgos. en la EBC. El plasma es la parte de una muestra de sangre que queda después de la centrifugación cuando se agrega un agente anticoagulante al extraer la muestra de sangre. Por lo tanto, para algunas de las muestras (citrato, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), tubos recubiertos con heparina), los investigadores almacenarán plasma (es decir, parte libre de células de la sangre con factores de coagulación) y para la muestra de sangre que se dejó coagular en el tubo, el material almacenado será suero (es decir, parte libre de células de la sangre sin factores de coagulación). Para calificar los marcadores y sustratos más adecuados para la estandarización, el análisis de las muestras de EBC debe completarse antes de poder analizar las muestras de sangre. Solo se realizarán análisis bioquímicos, no genéticos. Para los controles sanos de AP, los investigadores solicitarán una muestra de sangre adicional para la detección de aspergillus galactomannan. Para los controles sanos de neumonía por pneumocystis, los investigadores solicitarán un lavado oral de pneumocystis para la prueba de pneumocystis.