Az invazív pulmonalis aspergillosis non-invazív diagnózisa biomarkerek alkalmazásával a kilégzett levegő kondenzátumában (NIPA)

Háttér:

Folyamatban van a biomarkerek keresése a PA diagnózisának javítására és javítására, elsősorban a vérben és a bronchoalveoláris mosófolyadékban (BAL) észlelt markerekre összpontosítva. Ebben a tanulmányban a kutatók azt vizsgálják, hogy a kilégzett levegő kondenzátuma hasznos forrás-e a PA diagnosztizálására akár meglévő módszerekkel (pl. polimeráz láncreakció (PCR) kimutatása Aspergillus DNS) vagy a proteom elemzésével. Az Aspergillus DNS kivonatát azonban még soha nem végezték az EBC-ben. Ebben a kísérleti tanulmányban a kutatók azt vizsgálják, hogy lehetséges-e a DNS tisztítása a bizonyítottan pneumocystis tüdőgyulladásban szenvedő betegek EBC-jéből származó pneumocystisből egyrészt azért, mert a pneumocystis tüdőgyulladás diagnosztikai tesztje érzékenyebb és specifikusabb, másrészt azért, mert a pneumocystis tüdőgyulladás gyakoribb. mint PA. A vizsgálók megkímélik a PA betegek EBC-mintáit a fehérjeanalízishez ebben a vizsgálatban.

Korábbi tanulmányok nem vizsgálták az EBC fehérjeanalízis lehetőségét a PA fertőzések diagnosztikai eszközeként. Ebben a kísérleti tanulmányban a kutatók azt vizsgálják, hogy az Aspergillus fehérjék jelen vannak-e a bizonyított/valószínű/lehetséges PA betegek EBC-jében.

Mód:

A tanulmány összehasonlítja a kilélegzett levegő kondenzátum (EBC) fehérjeprofilját, amelyet bizonyítottan, valószínű vagy lehetséges pulmonalis aspergillus (PA) fertőzésben szenvedő betegektől és olyan PA-fertőzés gyanújával rendelkező betegektől gyűjtöttek össze, akiknél a rutin diagnosztikai munka kizárta a PA-t, valamint a negatív kontrollokat, azaz a betegeket, akik jóindulatú/indolens állapotok és PA gyanúja nélkül, azonos korú (10 éven belül) és nemű diagnosztikai vizsgálaton esik át a hematológiai osztályon, fertőző betegségek osztályán, légúti betegségek osztályán és szív-mellkasi sebészeti osztályán Aalborgi Egyetemi Kórház. A fő eredményt, azaz a specifikus fehérjék relatív mennyiségének átlagát az EBC-mintákban, páratlan t-tesztekkel hasonlítjuk össze a normálitás és a szórások értékelése után a két csoporton belül a következő összehasonlítások során: bizonyított/valószínű/lehetséges PA vs. olyan betegek, akiknél PA-t kizártak, és bizonyított/valószínű/lehetséges PA kontra negatív kontrollok. Három csoport összehasonlítása esetén az egytényezős varianciaanalízist alkalmazzuk, de ez nem tartozik vizsgálatunk fő hatókörébe.

Egy részvizsgálatban a vizsgálók EBC-t gyűjtenek a gyanús Pneumocystis jirovecii tüdőgyulladásban szenvedő betegektől és az egészséges kontrolloktól, azaz azoktól a betegektől, akiknél jóindulatú/indolens állapotok miatt diagnosztikai vizsgálatot végeznek, és akiknél nincs pneumocystis tüdőgyulladás gyanúja. A pneumocystis tüdőgyulladás diagnosztikai tesztjei nagyon specifikusak és érzékenyek. A kutatók megvizsgálják, hogy ezeknél a betegeknél kimutatható-e a pneumocystis DNS az EBC-ben, és megtudják, hogyan kell DNS-t kivonni az EBC-mintákból. A DNS-kivonás és analízis helyben történik. A kutatók az alvizsgálat tapasztalatait és eredményeit felhasználják az Aspergillus EBC-ben történő kimutatására vonatkozó további vizsgálatok megtervezéséhez a jelen kísérleti tanulmány után, ha releváns. A vizsgálók között négy, megerősített pneumocystis tüdőgyulladásban szenvedő beteg és négy egészséges kontrollcsoport vesz majd részt. A szájüregi lemosó pneumocystis teszteket közvetlenül az EBC begyűjtése előtt gyűjtik mind az esetek, mind az egészséges kontrollok esetében. Ha pneumocystis tüdőgyulladás gyanúja esetén nem erősítik meg a pneumocystis tüdőgyulladás diagnózisát, akkor a beteg negatív kontrollként szerepel.

Vérminták (pl. A vizsgálatban résztvevőktől (mind a PA-betegek, mind az egészséges kontrollok, mind a pneumocystis tüdőgyulladásban szenvedő betegek) rutin vérmintákból származó felesleges plazmát/szérumot tárolunk standardizálás és ellenőrzés, valamint a lehetséges leletek kiegészítése céljából. az EBC-ben. A plazma a vérmintának az a része, amely a centrifugálás után megmarad, amikor a vérminta levételekor véralvadásgátló szert adnak hozzá. Ezért egyes mintáknál (citrát, etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA), heparinnal bevont csövek) a vizsgálók plazmát tárolnak (pl. a vér sejtmentes része alvadási faktorokkal) és a csőben koagulálódni hagyott vérminta esetében a tárolt anyag szérum (pl. a vér sejtmentes része alvadási faktorok nélkül). Annak érdekében, hogy a legmegfelelőbb markereket és szubsztrátokat minősítsék a szabványosításhoz, az EBC-minták elemzését be kell fejezni a vérminták elemzése előtt. Csak biokémiai, genetikai elemzést nem végeznek. Az egészséges PA-kontrollok esetében a vizsgálók további vérmintát kérnek az aspergillus galaktomannán kimutatására. Az egészséges pneumocystis tüdőgyulladás kontrollja esetén a vizsgálók pneumocystis-szájöblítést kérnek a pneumocystis vizsgálatához.