Diagnóstico não invasivo de aspergilose pulmonar invasiva pelo uso de biomarcadores no condensado do ar exalado (NIPA)

Fundo:

A busca por biomarcadores para potencializar e melhorar o diagnóstico de PA está em andamento, principalmente com foco em marcadores detectados no sangue e nos fluidos do lavado broncoalveolar (LBA). Neste estudo, os investigadores investigarão se o condensado do ar exalado é uma fonte útil para o diagnóstico de PA, seja pelos métodos existentes (ou seja, detecção de DNA de Aspergillus por reação em cadeia da polimerase (PCR) ou por análise do proteoma. No entanto, a extração de DNA de Aspergillus nunca foi feita no EBC antes. Neste estudo piloto, os investigadores investigarão se é possível purificar o DNA de pneumocystis de EBC de pacientes com pneumonia pneumocystis comprovada, porque o teste de diagnóstico para pneumonia pneumocystis é mais sensível e específico e também devido ao fato de que pneumonia pneumocystis é mais comum do que PA. Os investigadores pouparão as amostras de EBC dos pacientes PA para a análise de proteínas neste estudo.

Nenhum estudo anterior investigou o potencial da análise de proteínas do EBC como uma ferramenta de diagnóstico em infecções por PA. Neste estudo piloto, os investigadores testarão se as proteínas de Aspergillus estão presentes no EBC de pacientes com PA comprovada/provável/possível.

Métodos:

O estudo comparará os perfis proteicos do condensado do ar exalado (EBC) coletado de pacientes com infecção comprovada, provável ou possível por aspergillus pulmonar (PA) e pacientes com suspeita de infecção por PA, em que o diagnóstico de rotina excluiu PA e controles negativos, ou seja, pacientes que submeter-se a investigação diagnóstica para quadros benignos/indolentes e sem suspeita de PA, com mesma idade (dentro de 10 anos) e gênero nos ambulatórios de hematologia, infectologia, doenças respiratórias e cirurgia cardiotorácica do Hospital Universitário de Aalborg. O desfecho principal, ou seja, as médias das quantidades relativas de proteínas específicas nas amostras de EBC, serão comparados por testes t não pareados após avaliação da normalidade e desvios padrão dentro dos dois grupos nas seguintes comparações: PA comprovada/provável/possível vs .pacientes em que PA foi descartada e PA comprovada/provável/possível vs. controles negativos. Caso três grupos sejam comparados, a análise de variância unidirecional será aplicada, mas isso não está dentro do escopo principal de nosso estudo.

Em um subestudo, os investigadores coletarão EBC de pacientes com suspeita de pneumonia por Pneumocystis jirovecii e controles saudáveis, ou seja, pacientes submetidos a investigação diagnóstica para condições benignas/indolentas e sem suspeita de pneumonia por Pneumocystis. Os testes diagnósticos para pneumonia por pneumocystis são altamente específicos e sensíveis. Os investigadores testarão se o DNA do pneumocystis é detectável no EBC desses pacientes e aprenderão como o DNA deve ser extraído das amostras do EBC. A extração e análise de DNA serão feitas localmente. Os investigadores usarão as experiências e os resultados deste subestudo no desenho de estudos adicionais de detecção de Aspergillus no EBC após este estudo piloto, se relevante. Os investigadores incluirão quatro pacientes com pneumonia por Pneumocystis confirmada e quatro controles saudáveis. Os testes de pneumocystis de lavagens orais serão coletados imediatamente antes da coleta do EBC para ambos os casos e controles saudáveis. Se o diagnóstico de pneumonia por Pneumocystis não for confirmado em um paciente com suspeita de pneumonia por Pneumocystis, o paciente será incluído como controle negativo.

Amostras de sangue (ou seja, o excesso de plasma/soro de amostras de sangue de rotina coletadas como parte da rotina diagnóstica) dos participantes do estudo (pacientes com PA, controles saudáveis ​​e pacientes com pneumonia por pneumocystis) serão armazenados para padronização e verificação e complementação da análise de possíveis achados na EBC. O plasma é a parte de uma amostra de sangue que resta após a centrifugação quando um agente anticoagulante é adicionado após a coleta da amostra de sangue. Portanto, para algumas das amostras (citrato, ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), tubos revestidos com heparina), os investigadores armazenarão plasma (ou seja, parte livre de células do sangue com fatores de coagulação) e para a amostra de sangue que foi deixada coagular no tubo, o material armazenado será soro (ou seja, parte livre de células do sangue sem fatores de coagulação). Para qualificar os marcadores e substratos mais adequados para padronização, a análise das amostras de EBC deve ser concluída antes que as amostras de sangue possam ser analisadas. Apenas bioquímica, nenhuma análise genética será realizada. Para os controles PA saudáveis, os investigadores solicitarão uma amostra de sangue extra para detecção de aspergillus galactomannan. Para os controles saudáveis ​​de pneumonia por Pneumocystis, os investigadores solicitarão uma lavagem oral de Pneumocystis para teste de Pneumocystis.