Niet-invasieve diagnose van invasieve pulmonale aspergillose door gebruik van biomarkers in uitgeademd ademcondensaat (NIPA)

Achtergrond:

De zoektocht naar biomarkers om de diagnose van PA te versterken en te verbeteren, is aan de gang, voornamelijk gericht op markers die worden gedetecteerd in het bloed en bronchoalveolaire lavage (BAL) -vloeistoffen. In deze studie zullen de onderzoekers onderzoeken of uitgeademde luchtcondensaat een bruikbare bron is voor de diagnose van PA, hetzij door middel van bestaande methoden (d.w.z. polymerase kettingreactie (PCR) detectie van Aspergillus DNA) of door analyse van het proteoom. Extractie van Aspergillus-DNA is echter nog nooit eerder in de EBC uitgevoerd. In deze pilotstudie gaan de onderzoekers onderzoeken of het mogelijk is om DNA uit pneumocystis te zuiveren uit EBC van patiënten met bewezen pneumocystis-pneumonie, zowel omdat de diagnostische test voor pneumocystis-pneumonie gevoeliger en specifieker is, als ook omdat pneumocystis-pneumonie vaker voorkomt. dan PA. De onderzoekers zullen de EBC-monsters van PA-patiënten sparen voor de eiwitanalyse in deze studie.

Geen eerdere studies hebben het potentieel van EBC-eiwitanalyse als diagnostisch hulpmiddel bij PA-infecties onderzocht. In deze pilootstudie zullen de onderzoekers testen of Aspergillus-eiwitten aanwezig zijn in de EBC van patiënten met bewezen/waarschijnlijke/mogelijke PA.

methoden:

De studie zal de eiwitprofielen vergelijken van uitgeademd ademcondensaat (EBC) verzameld van patiënten met bewezen, waarschijnlijke of mogelijke pulmonale aspergillus (PA) infectie en patiënten met vermoedelijke PA-infectie bij wie routinematig diagnostisch onderzoek PA uitsluit, en negatieve controles, d.w.z. patiënten die diagnostisch onderzoek ondergaan voor benigne/indolente aandoeningen en zonder verdenking op PA, met dezelfde leeftijd (binnen een bereik van 10 jaar) en geslacht van de polikliniek van de afdeling hematologie, afdeling infectieziekten, afdeling luchtwegaandoeningen en afdeling cardiothoracale chirurgie van Universitair ziekenhuis van Aalborg. De hoofduitkomst, d.w.z. gemiddelden van de relatieve hoeveelheden van specifieke eiwitten in de EBC-monsters, zal worden vergeleken met ongepaarde t-testen na beoordeling van normaliteit en standaarddeviaties binnen de twee groepen in de volgende vergelijkingen: bewezen/waarschijnlijk/mogelijk PA vs patiënten bij wie PA was uitgesloten en bewezen/waarschijnlijk/mogelijk PA vs. negatieve controles. In het geval dat drie groepen worden vergeleken, zal de eenzijdige variantieanalyse worden toegepast, maar dit valt niet binnen het hoofdbereik van ons onderzoek.

In een substudie zullen de onderzoekers EBC verzamelen van patiënten met verdenking op Pneumocystis jirovecii-pneumonie en gezonde controles, d.w.z. patiënten die diagnostisch onderzoek ondergaan voor goedaardige/indolente aandoeningen en zonder verdenking op pneumocystis-pneumonie. Diagnostische tests voor pneumocystis-pneumonie zijn zeer specifiek en gevoelig. De onderzoekers zullen testen of pneumocystis-DNA detecteerbaar is in de EBC van deze patiënten en leren hoe DNA uit de EBC-monsters moet worden geëxtraheerd. DNA-extractie en -analyse zal lokaal worden gedaan. De onderzoekers zullen de ervaringen en resultaten van dit deelonderzoek gebruiken bij het opzetten van verdere onderzoeken naar detectie van Aspergillus in de EBC na deze pilotstudie, indien relevant. De onderzoekers zullen vier patiënten opnemen met bevestigde pneumocystis-pneumonie en vier gezonde controles. Orale wasbeurten pneumocystis-tests zullen worden verzameld onmiddellijk voordat de EBC wordt verzameld voor zowel gevallen als gezonde controles. Als de diagnose pneumocystis-pneumonie niet wordt bevestigd bij een patiënt met verdenking op pneumocystis-pneumonie, wordt de patiënt opgenomen als negatieve controle.

Bloedmonsters (bijv. overtollig plasma/serum van routinebloedmonsters afgenomen als onderdeel van routinematig diagnostisch onderzoek) van de studiedeelnemers (zowel PA-patiënten, gezonde controles en pneumocystis-pneumoniepatiënten) zal worden opgeslagen voor standaardisatie en verificatie en als aanvulling op de analyse van mogelijke bevindingen in de EBK. Plasma is het deel van een bloedmonster dat overblijft na centrifugeren wanneer een antistollingsmiddel wordt toegevoegd bij het afnemen van het bloedmonster. Daarom zullen de onderzoekers voor sommige monsters (citraat, ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA), met heparine gecoate buisjes) plasma opslaan (d.w.z. celvrij deel van het bloed met stollingsfactoren) en voor het bloedmonster dat in de buis mocht stollen, zal het opgeslagen materiaal serum zijn (d.w.z. celvrij deel van het bloed zonder stollingsfactoren). Om de meest geschikte markers en substraten voor standaardisatie te kwalificeren, moet de analyse van de EBC-monsters zijn voltooid voordat de bloedmonsters kunnen worden geanalyseerd. Alleen biochemisch, er wordt geen genetische analyse uitgevoerd. Voor de gezonde PA-controles vragen de onderzoekers om een ​​extra bloedstaal voor detectie van aspergillus galactomannan. Voor de controles van gezonde pneumocystis-pneumonie zullen de onderzoekers om een ​​pneumocystis-mondspoeling vragen om pneumocystis te testen.