Ikke-invasiv diagnose af invasiv pulmonal aspergillose ved brug af biomarkører i udåndingskondensat (NIPA)

Baggrund:

Søgningen efter biomarkører til at forbedre og forbedre diagnosen af ​​PA er i gang, hovedsageligt fokuseret på markører påvist i blodet og bronchoalveolar lavage (BAL) væsker. I denne undersøgelse vil efterforskerne undersøge, om udåndingskondensat er en nyttig kilde til diagnosticering af PA enten ved eksisterende metoder (dvs. polymerasekædereaktion (PCR) påvisning af Aspergillus DNA) eller ved analyse af proteomet. Ekstraktion af Aspergillus DNA er dog aldrig blevet udført i EBC før. I dette pilotstudie vil efterforskerne undersøge, om det er muligt at oprense DNA fra pneumocystis fra EBC fra patienter med påvist pneumocystis pneumoni, både fordi den diagnostiske test for pneumocystis pneumoni er mere følsom og specifik og også på grund af det faktum, at pneumocystis pneumoni er mere almindelig. end PA. Efterforskerne vil spare EBC-prøverne fra patienters PA til proteinanalysen i denne undersøgelse.

Ingen tidligere undersøgelser har undersøgt potentialet af EBC-proteinanalyse som et diagnostisk værktøj ved PA-infektioner. I dette pilotstudie vil efterforskerne teste, om Aspergillus-proteiner er til stede i EBC fra patienter med påvist/sandsynlig/mulig PA.

Metoder:

Undersøgelsen vil sammenligne proteinprofilerne for udåndet åndedrætskondensat (EBC) indsamlet fra patienter med påvist, sandsynlig eller mulig lunge-aspergillus (PA)-infektion og patienter med mistanke om PA-infektion, hvor rutinemæssig diagnostisk oparbejdning udelukker PA, og negative kontroller, dvs. patienter, som gennemgår en diagnostisk undersøgelse for benigne/indolente tilstande og uden mistanke om PA, med samme alder (inden for 10 år) og køn fra ambulatoriet på hæmatologisk afdeling, infektionsmedicinsk afdeling, luftvejsafdelingen og afdelingen for hjerte- og thoraxkirurgi kl. Aalborg Universitetshospital. Hovedresultatet, dvs. gennemsnittet af de relative mængder af specifikke proteiner i EBC-prøverne, vil blive sammenlignet med uparrede t-tests efter vurdering af normalitet og standardafvigelser inden for de to grupper i følgende sammenligninger: bevist/sandsynlig/mulig PA vs. patienter, hvor PA var udelukket og påvist/sandsynlig/mulig PA vs. negative kontroller. I tilfælde af at tre grupper sammenlignes, vil envejsvariansanalysen blive anvendt, men dette er ikke inden for vores undersøgelses hovedområde.

I et delstudie vil efterforskerne indsamle EBC fra patienter med mistanke om Pneumocystis jirovecii-lungebetændelse og raske kontroller, dvs. patienter, der gennemgår diagnostisk oparbejdning for benigne/indolente tilstande og uden mistanke om pneumocystis-lungebetændelse. Diagnostiske tests for pneumocystis lungebetændelse er meget specifikke og følsomme. Efterforskerne vil teste, om pneumocystis-DNA kan påvises i EBC fra disse patienter og lære, hvordan DNA skal ekstraheres fra EBC-prøverne. DNA-ekstraktion og analyse vil blive foretaget lokalt. Efterforskerne vil bruge erfaringerne og resultaterne fra dette delstudie i udformningen af ​​yderligere undersøgelser af påvisning af Aspergillus i EBC efter dette pilotstudie, hvis det er relevant. Efterforskerne vil omfatte fire patienter med bekræftet pneumocystis-lungebetændelse og fire raske kontroller. Orale vaskepneumocystis-tests vil blive indsamlet umiddelbart før EBC indsamles for både tilfælde og raske kontroller. Hvis diagnosen pneumocystis pneumoni ikke er bekræftet hos en patient med mistanke om pneumocystis pneumoni, vil patienten indgå som negativ kontrol.

Blodprøver (dvs. overskydende plasma/serum fra rutinemæssige blodprøver udtaget som en del af rutinemæssig diagnostisk oparbejdning) fra studiedeltagerne (både PA-patienter, raske kontroller og pneumocystis pneumoni-patienter) vil blive opbevaret til standardisering og verifikation og supplerende analyse af mulige fund i EBC. Plasma er den del af en blodprøve, der efterlades efter centrifugering, når et antikoagulerende middel tilsættes ved udtagning af blodprøven. Derfor vil efterforskerne for nogle af prøverne (citrat, ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA), heparincoatede rør) opbevare plasma (dvs. cellefri del af blodet med koagulationsfaktorer) og for blodprøven, der fik lov til at koagulere i røret, vil det opbevarede materiale være serum (dvs. cellefri del af blodet uden koagulationsfaktorer). For at kvalificere de bedst egnede markører og substrater til standardisering, skal analysen af ​​EBC-prøverne afsluttes, før blodprøverne kan analyseres. Kun biokemisk, ingen genetisk analyse vil blive udført. For de raske PA-kontroller vil efterforskerne bede om en ekstra blodprøve til påvisning af aspergillus galactomannan. For de raske pneumocystis lungebetændelseskontroller vil efterforskerne bede om en pneumocystis oral vask til test af pneumocystis.