Ikke-invasiv diagnose av invasiv lungeaspergillose ved bruk av biomarkører i utåndet pustkondensat (NIPA)

Bakgrunn:

Søket etter biomarkører for å forbedre og forbedre diagnosen av PA pågår, hovedsakelig fokusert på markører oppdaget i blod og bronkoalveolar lavage (BAL) væsker. I denne studien vil etterforskerne undersøke om utåndet pustkondensat er en nyttig kilde for diagnostisering av PA enten ved eksisterende metoder (dvs. polymerasekjedereaksjon (PCR) påvisning av Aspergillus DNA) eller ved analyse av proteomet. Imidlertid har utvinning av Aspergillus DNA aldri blitt gjort i EBC før. I denne pilotstudien skal etterforskerne undersøke om det er mulig å rense DNA fra pneumocystis fra EBC hos pasienter med påvist pneumocystis pneumoni både fordi den diagnostiske testen for pneumocystis pneumoni er mer sensitiv og spesifikk og også på grunn av at pneumocystis pneumoni er mer vanlig. enn PA. Etterforskerne vil spare EBC-prøvene fra pasienter PA for proteinanalysen i denne studien.

Ingen tidligere studier har undersøkt potensialet til EBC-proteinanalyse som et diagnostisk verktøy ved PA-infeksjoner. I denne pilotstudien vil etterforskerne teste om Aspergillus-proteiner er tilstede i EBC fra pasienter med påvist/sannsynlig/mulig PA.

Metoder:

Studien vil sammenligne proteinprofilene til utåndet pustkondensat (EBC) samlet inn fra pasienter med påvist, sannsynlig eller mulig lunge-aspergillus (PA)-infeksjon og pasienter med mistenkt PA-infeksjon der rutinemessig diagnostisk oppfølging utelukket PA, og negative kontroller, dvs. pasienter som gjennomgå diagnostikk for benigne/indolente tilstander og uten mistanke om PA, med samme alder (innenfor et område på 10 år) og kjønn fra poliklinikken ved hematologisk avdeling, infeksjonsmedisinsk avdeling, avdeling for luftveissykdommer og avdeling for hjerte- og thoraxkirurgi kl. Aalborg Universitetssykehus. Hovedutfallet, dvs. gjennomsnittet av de relative mengder av spesifikke proteiner i EBC-prøvene, vil bli sammenlignet med uparrede t-tester etter vurdering av normalitet og standardavvik innenfor de to gruppene i følgende sammenligninger: bevist/sannsynlig/mulig PA vs. pasienter hvor PA var utelukket og påvist/sannsynlig/mulig PA vs. negative kontroller. I tilfelle tre grupper sammenlignes, vil enveisvariansanalysen bli brukt, men dette er ikke innenfor hovedomfanget av vår studie.

I en delstudie vil etterforskerne samle inn EBC fra pasienter med mistenkt Pneumocystis jirovecii-lungebetennelse og friske kontroller, dvs. pasienter som gjennomgår diagnostisk oppfølging for godartede/indolente tilstander og uten mistanke om pneumocystis-lungebetennelse. Diagnostiske tester for pneumocystis lungebetennelse er svært spesifikke og sensitive. Etterforskerne vil teste om pneumocystis DNA er påviselig i EBC fra disse pasientene og lære hvordan DNA bør ekstraheres fra EBC-prøvene. DNA-ekstraksjon og analyse vil bli gjort lokalt. Etterforskerne vil bruke erfaringene og resultatene fra denne delstudien i utformingen av videre studier av påvisning av Aspergillus i EBC etter denne pilotstudien, hvis relevant. Etterforskerne vil inkludere fire pasienter med bekreftet pneumocystis-lungebetennelse og fire friske kontroller. Orale vaskepneumocystis-tester vil bli samlet inn umiddelbart før EBC samles for både tilfeller og friske kontroller. Dersom diagnosen pneumocystis pneumoni ikke er bekreftet hos en pasient med mistanke om pneumocystis pneumoni, vil pasienten inkluderes som negativ kontroll.

Blodprøver (dvs. overskytende plasma/serum fra rutinemessige blodprøver tatt som en del av rutinemessig diagnostisk opparbeidelse) fra studiedeltakerne (både PA-pasienter, friske kontroller og pasienter med pneumocystis lungebetennelse) vil bli lagret for standardisering og verifisering og supplerende analyse av mulige funn i EBC. Plasma er den delen av en blodprøve som er igjen etter sentrifugering når et antikoagulasjonsmiddel tilsettes ved uttak av blodprøven. Derfor, for noen av prøvene (citrat, etylendiamintetraeddiksyre (EDTA), heparinbelagte rør), vil etterforskerne lagre plasma (dvs. cellefri del av blodet med koagulasjonsfaktorer) og for blodprøven som fikk koagulere i røret, vil det lagrede materialet være serum (dvs. cellefri del av blodet uten koagulasjonsfaktorer). For å kvalifisere de best egnede markørene og substratene for standardisering, må analysen av EBC-prøvene være fullført før blodprøvene kan analyseres. Kun biokjemisk, ingen genetisk analyse vil bli utført. For de friske PA-kontrollene vil etterforskerne be om en ekstra blodprøve for påvisning av aspergillus galactomannan. For de friske pneumocystis-lungebetennelseskontrollene, vil etterforskerne be om en pneumocystis oral vask for test av pneumocystis.