Neinvazivní diagnostika invazivní plicní aspergilózy pomocí biomarkerů v kondenzátu vydechovaného dechu (NIPA)

Pozadí:

Pokračuje hledání biomarkerů pro zlepšení a zlepšení diagnózy PA, zaměřené především na markery detekované v krvi a tekutinách z bronchoalveolární laváže (BAL). V této studii budou vyšetřovatelé zkoumat, zda je kondenzát vydechovaného vzduchu užitečným zdrojem pro diagnostiku PA buď stávajícími metodami (tj. polymerázová řetězová reakce (PCR) detekce DNA Aspergillus) nebo analýzou proteomu. Extrakce DNA Aspergillus se však v EBC nikdy předtím neprováděla. V této pilotní studii budou vyšetřovatelé zkoumat, zda je možné purifikovat DNA z pneumocystové pneumonie z EBC pacientů s prokázanou pneumocystovou pneumonií jednak proto, že diagnostický test na pneumocystovou pneumonii je citlivější a specifičtější, a také proto, že pneumocystová pneumonie je častější. než PA. Vyšetřovatelé ušetří vzorky EBC od pacientů PA pro analýzu proteinů v této studii.

Žádné předchozí studie nezkoumaly potenciál analýzy proteinů EBC jako diagnostického nástroje u infekcí PA. V této pilotní studii budou vyšetřovatelé testovat, zda jsou proteiny Aspergillus přítomny v EBC od pacientů s prokázanou/pravděpodobnou/možnou PA.

Metody:

Studie bude porovnávat proteinové profily kondenzátu vydechovaného vzduchu (EBC) odebrané od pacientů s prokázanou, pravděpodobnou nebo možnou infekcí plicního aspergilu (PA) a pacientů s podezřením na infekci PA, kde rutinní diagnostické vyšetření vyloučilo PA, a negativní kontroly, tj. absolvovat diagnostické vyšetření pro benigní/indolentní stavy a bez podezření na PA, se stejným věkem (v rozmezí 10 let) a pohlavím z ambulance hematologického oddělení, infekčního oddělení, oddělení respiračních nemocí a oddělení kardiotorakální chirurgie na Fakultní nemocnice Aalborg. Hlavní výsledek, tedy průměry relativních množství specifických proteinů ve vzorcích EBC, bude porovnán nepárovými t-testy po posouzení normality a směrodatných odchylek v rámci dvou skupin v následujících srovnáních: prokázaná/pravděpodobná/možná PA vs. pacienti, kde byla PA vyloučena a prokázána/pravděpodobná/možná PA vs. negativní kontroly. V případě srovnání tří skupin bude použita jednosměrná analýza rozptylu, která však není hlavním předmětem naší studie.

V dílčí studii budou vyšetřovatelé shromažďovat EBC od pacientů s podezřením na pneumonii způsobenou Pneumocystis jirovecii a zdravých kontrol, tj. pacientů, kteří podstoupili diagnostické vyšetření pro benigní/indolentní stavy a bez podezření na pneumocystovou pneumonii. Diagnostické testy na pneumocystovou pneumonii jsou vysoce specifické a citlivé. Vyšetřovatelé otestují, zda je DNA pneumocystis detekovatelná v EBC od těchto pacientů, a zjistí, jak by měla být DNA extrahována ze vzorků EBC. Extrakce a analýza DNA bude provedena lokálně. Vyšetřovatelé použijí zkušenosti a výsledky z této dílčí studie při návrhu dalších studií detekce Aspergillus v EBC po této pilotní studii, bude-li to relevantní. Vyšetřovatelé budou zahrnovat čtyři pacienty s potvrzenou pneumocystovou pneumonií a čtyři zdravé kontroly. Testy na orální výplach pneumocystis budou odebrány bezprostředně před odběrem EBC pro případy i zdravé kontroly. Pokud se u pacienta s podezřením na pneumocystovou pneumonii nepotvrdí diagnóza pneumocystové pneumonie, bude pacient zařazen jako negativní kontrola.

Vzorky krve (tj. přebytečná plazma/sérum z rutinních krevních vzorků odebraných v rámci rutinního diagnostického zpracování od účastníků studie (pacientů s PA, zdravých kontrol a pacientů s pneumocystovou pneumonií) bude uložena pro standardizaci a ověření a doplnění analýzy možných nálezů v EBC. Plazma je část krevního vzorku, která zbude po centrifugaci, když se při odběru krevního vzorku přidá antikoagulační činidlo. Proto u některých vzorků (citrát, kyselina ethylendiamintetraoctová (EDTA), heparinem potažené zkumavky) budou vyšetřovatelé uchovávat plazmu (tj. bezbuněčná část krve s koagulačními faktory) a pro vzorek krve, který se nechal ve zkumavce koagulovat, bude skladovaným materiálem sérum (tj. bezbuněčná část krve bez koagulačních faktorů). Aby bylo možné kvalifikovat nejvhodnější markery a substráty pro standardizaci, musí být před analýzou vzorků krve dokončena analýza vzorků EBC. Nebude prováděna pouze biochemická, žádná genetická analýza. U zdravých PA kontrol budou vyšetřovatelé žádat o extra vzorek krve pro detekci aspergillus galaktomannan. U zdravých kontrol pneumocystové pneumonie vyšetřovatelé požádají o výplach ústní dutiny způsobené pneumocystou pro test na pneumocystovou infekci.