DNA-metylaatioanalyysi akuutissa sepelvaltimotaudissa ja eteisvärinässä: Dianan kliininen tutkimus

Tutkimuspopulaatiossa on 20 tervettä kontrollia, jotka on otettu elektrokardiografiseen kontrolliin ilman muita kardiologisia, elektrokardiografisia ja kliinisiä todisteita sydämen patologioista, 20 potilasta, joilla on ACS, ja 40 potilasta, joilla on ACS vaivaa tai ei AF:ssä. "AORN A. Cardarelli" (Napoli, Italia) (UOC:n johtaja: tohtori Ciro Mauro, AORN Cardarellin tutkimuksen yksikön päällikkönä; avustajanaan tohtori Antonio Ruocco, kardiologian lääketieteellinen johtaja).

Potilaat, joilla on kliinisesti diagnosoitu AF ja ACS, erityisesti epästabiili angina pectoris (UAP), akuutti sydäninfarkti ilman ST-nousua (NSTEMI) ja akuutti sydäninfarkti ST-koholla (STEMI) kliinisen historian, oireiden, EKG:n, vaurion biomarkkerien perusteella sydämen, sepelvaltimon angiografian, riskitekijöiden ja/tai muiden UAP/NSTEMI:n ja STEMI:n ohjeiden mukaiset kliiniset testit rekrytoidaan "AORN A. Cardarellin" (Napoli, Italia) UTIC:lle. Kaikki värvätyt koehenkilöt allekirjoittavat kirjallisen tietoisen suostumuksen verinäytteen ottamiseen voittoa tavoittelemattomiin tutkimustarkoituksiin. Lääkehoito, diagnostiset tiedot ja kliiniset tutkimustiedot sekä sairaushistoria kerätään potilaskertomuksista. Verinäytteet otetaan normaalin kliinisen käytännön aikana ilman lisänäytteitä ensimmäisestä vastaanottopäivästä ennen lääkkeiden, kuten hepariinin ja varjoaineiden, käyttöä (> 90 % näytteistä kerätään akuutin tapahtuman vuorokauden sisällä). Potilaat, joilla on primaarinen kardiomyopatia, synnynnäinen sydänsairaus, läppäsairaus, aivohalvaus, diabetes mellitus, autoimmuunisairaudet, akuutit infektiot, krooniset keuhkoinfektiot, keuhkoahtaumatauti, emfyseema, pneumokonioosi, astma, krooninen keuhkoputkentulehdus, tuberkuloosi, keuhkopussintulehdus, krooninen maksasairaus ja munuaissairaus, kilpirauhasen liikatoiminta tai koehenkilöt, jotka väittävät olevansa akuutti kuumeinen sairaus 2 viikon sisällä, suljetaan pois tutkimuksesta.

Kokoveren otto suoritetaan potilailta ja kontrolleilta normaalin kliinisen käytännön aikana. Biologiset näytteet käsitellään välittömästi ja säilytetään +4 °C:ssa U.O.C:n alueellisessa referenssibiopankissa. kliinisen immunologian ja immunohematologian, verensiirtolääketieteen ja transplantaatioimmunologian liitteenä olevalla Single Regional Reference Laboratory for Organ Transplant Immunology (LIT) -osastolla Campanian yliopiston sisätautien laitoksella "Luigi Vanvitelli" (Napoli, Italia).

Yhteensä 25 ml ääreislaskimoverta kerätään EDTA-putkiin ja käsitellään yleensä 1 tunnin sisällä. Perifeerisen veren mononukleaarisolut (PBMNC:t) eristetään Ficoll-gradientilla käyttämällä Histopaque®-1077:ää (Sigma-Aldrich) valmistajan ohjeiden mukaisesti.

CD4+- ja CD8+-T-lymfosyytit puhdistetaan PBMC:istä käyttämällä EasySep™ Human CD4+ T and Cell Isolation Kit- ja EasySep™ Human CD4+ T Cell Isolation Kit -pakkausta (STEMCELL Technologies) alkaen 5 x 107/ml PBMNC:tä, vastaavasti.

Jokaisen tutkimuksen osanottajan puhdistetun lymfosiittialajoukon genominen DNA eristetään välittömästi solun eristämisen jälkeen käyttämällä DNeasy Blood & Tissue Kit -sarjaa (Qiagen) valmistajan protokollan mukaisesti. DNA:n konsentraatio ja puhtaus määritetään NanoDrop-spektrofotometrillä ND-2000 (Thermo Scientific) arvioimalla absorbanssisuhde A260/A280 ja DNA:n eheys tarkistetaan 1 % agaroosigeelillä.

Ulkopuolinen palvelu suorittaa RRB-sekvensoinnin ja bioinformaattiset analyysit.