DNS-metilációs elemzés akut koszorúér-szindrómában és pitvarfibrillációban: DIANA klinikai vizsgálat

A vizsgálati populáció 20 egészséges kontrollt tartalmaz majd elektrokardiográfiás kontrollon a szívpatológiák további kardiológiai, elektrokardiográfiás és klinikai bizonyítéka nélkül, 20 ACS-ben szenvedő és 40 AF-ben érintett vagy nem AF-ben szenvedő ACS-ben szenvedő beteget, akiket az UOC of Cardiology UTIC-jében vettek fel. "AORN A. Cardarelli" (Nápoly, Olaszország) (az UOC igazgatója: Dr. Ciro Mauro, mint az AORN Cardarelli vizsgálati osztályának vezetője; segítette Dr. Antonio Ruocco, a kardiológiai orvosi igazgató).

Klinikailag diagnosztizált AF és ACS, különösen instabil angina pectoris (UAP), ST-eleváció nélküli akut miokardiális infarktus (NSTEMI) és ST-elevációval járó akut miokardiális infarktus (STEMI) betegek a klinikai anamnézis, a tünetek, az EKG és a károsodás biomarkerei alapján szív-, koszorúér-angiográfia, rizikófaktorok és/vagy egyéb klinikai tesztek az UAP/NSTEMI-re és a STEMI-re vonatkozó iránymutatásoknak megfelelően az "AORN A. Cardarelli" (Nápoly, Olaszország) UTIC-jében vesznek fel. Minden felvett alany írásos beleegyezését írja alá a non-profit kutatási célú vérvételhez. A gyógyszeres terápiát, a diagnosztikai információkat és a klinikai vizsgálati adatokat és a kórtörténetet az orvosi feljegyzésekből gyűjtik össze. A vérmintákat a normál klinikai gyakorlat során gyűjtik anélkül, hogy további mintákat vennének a felvétel első napjától a gyógyszerek, például a heparin és a kontrasztanyagok alkalmazása előtt (a minták > 90%-át az akut eseményt követő napon belül gyűjtik). Primer cardiomyopathiában, veleszületett szívbetegségben, billentyűbetegségben, stroke-ban, diabetes mellitusban, autoimmun betegségekben, akut fertőzésekben, krónikus tüdőfertőzésekben, COPD-ben, tüdőtágulásban, pneumoconiosisban, asztmában, krónikus bronchitisben, tuberkulózisban, mellhártyagyulladásban, krónikus máj- és vesebetegségben, pajzsmirigy-túlműködésben szenvedő betegek vagy azokat az alanyokat, akik 2 héten belül akut lázas betegséget állítanak be, kizárják a vizsgálatból.

A teljes vér gyűjtése a betegektől és a kontrollcsoportoktól a normál klinikai gyakorlat során történik. A biológiai mintákat azonnal feldolgozzák és +4 °C-on tárolják az U.O.C. regionális referencia biobankjában. Klinikai Immunológia és Immunhematológia, Transzfúziós Medicina és Transzplantációs Immunológia a mellékelt Egyetlen Regionális Szervátültetés Immunológiai Referencia Laboratóriumával (LIT) a Campania "Luigi Vanvitelli" (Nápoly, Olaszország) Egyetem Belgyógyászati ​​Tanszékén.

Összesen 25 ml perifériás vénás vért gyűjtenek EDTA-csövekbe, és általában 1 órán belül feldolgozzák. A perifériás vér mononukleáris sejtjeit (PBMNC) Ficoll gradienssel izoláljuk Histopaque®-1077 (Sigma-Aldrich) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint.

A CD4+ és CD8+ T limfocitákat a PBMC-kből az EasySep™ Humán CD4+ T és Cell Isolation Kit és az EasySep™ Human CD4+ T Cell Isolation Kit (STEMCELL Technologies) segítségével tisztítják meg, 5x107/ml PBMNC-vel kezdve.

Az egyes vizsgálati résztvevőkből származó tisztított limfocita alcsoport genomiális DNS-ét közvetlenül a sejtizolálás után izoláljuk DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen) segítségével a gyártó protokollja szerint. A DNS koncentrációját és tisztaságát NanoDrop spektrofotométer ND-2000 (Thermo Scientific) segítségével határozzuk meg az A260/A280 abszorbancia arány és a DNS integritásának 1%-os agaróz gélen történő ellenőrzésével.

Az RRB szekvenálást és a bioinformatikai elemzéseket külső szolgálat végzi.