Analisi della metilazione del DNA nella sindrome coronarica acuta e nella fibrillazione atriale: trial clinico DIANA

La popolazione in studio comprenderà 20 controlli sani ammessi al controllo elettrocardiografico senza ulteriori evidenze cardiologiche, elettrocardiografiche e cliniche di patologie cardiache, 20 pazienti con SCA e 40 pazienti con SCA affetti o meno da FA, reclutati presso l'UTIC della UOC di Cardiologia presso il "AORN A. Cardarelli" (Napoli, Italia) (Direttore UOC: Dott. Ciro Mauro, in qualità di Capo Unità dello studio presso AORN Cardarelli; coadiuvato dal Dott. Antonio Ruocco, Direttore Sanitario di Cardiologia).

Pazienti con diagnosi clinica di FA e SCA, in particolare angina pectoris instabile (UAP), infarto miocardico acuto senza sopraslivellamento del tratto ST (NSTEMI) e infarto miocardico acuto con sopraslivellamento del tratto ST (STEMI), sulla base di anamnesi clinica, sintomi, ECG, biomarcatori di danno angiografia cardiaca, coronarica, fattori di rischio e/o altri test clinici secondo le linee guida per UAP/NSTEMI e STEMI, saranno reclutati presso l'UTIC dell'AORN A. Cardarelli (Napoli, Italia). Tutti i soggetti reclutati firmeranno un consenso informato scritto per un prelievo di sangue per scopi di ricerca senza scopo di lucro. La terapia farmacologica, le informazioni diagnostiche, i dati degli esami clinici e l'anamnesi saranno raccolti dalle cartelle cliniche. I campioni di sangue verranno raccolti durante la normale pratica clinica senza prelevare ulteriori campioni dal primo giorno di ricovero prima dell'uso di farmaci come eparina e mezzi di contrasto (> 90% dei campioni saranno raccolti entro un giorno dall'evento acuto). Pazienti con cardiomiopatie primarie, cardiopatie congenite, malattie valvolari, ictus, diabete mellito, malattie autoimmuni, infezioni acute, infezioni polmonari croniche, BPCO, enfisema, pneumoconiosi, asma, bronchite cronica, tubercolosi, pleurite, malattie epatiche e renali croniche, ipertiroidismo o soggetti che rivendicheranno una malattia febbrile acuta entro 2 settimane, saranno esclusi dallo studio.

La raccolta del sangue intero sarà effettuata da pazienti e controlli durante la normale pratica clinica. I campioni biologici saranno immediatamente processati e conservati a +4 °C presso la biobanca regionale di riferimento dell'U.O.C. di Immunologia Clinica e Immunoematologia, Medicina Trasfusionale e Immunologia dei Trapianti con annesso Laboratorio Unico Regionale di Riferimento per l'Immunologia dei Trapianti d'Organo (LIT) presso il Dipartimento di Medicina Interna dell'Università della Campania "Luigi Vanvitelli" (Napoli, Italia).

Un totale di 25 ml di sangue venoso periferico verrà raccolto in provette EDTA e solitamente processato entro 1 ora. Le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMNC) saranno isolate mediante gradiente di Ficoll usando Histopaque®-1077 (Sigma-Aldrich) secondo le istruzioni del produttore.

I linfociti T CD4+ e CD8+ saranno purificati dalle PBMC utilizzando EasySep™ Human CD4+ T and Cell Isolation Kit e EasySep™ Human CD4+ T Cell Isolation Kit (STEMCELL Technologies), partendo rispettivamente da 5x107/mL di PBMNC.

Il DNA genomico del sottogruppo di linfociti purificati di ciascun partecipante allo studio verrà isolato immediatamente dopo l'isolamento cellulare utilizzando il kit DNeasy Blood & Tissue (Qiagen) secondo il protocollo del produttore. La concentrazione e la purezza del DNA saranno determinate utilizzando lo spettrofotometro NanoDrop ND-2000 (Thermo Scientific) attraverso la valutazione del rapporto di assorbanza A260/A280 e l'integrità del DNA verificata su gel di agarosio all'1%.

Il sequenziamento RRB e le analisi bioinformatiche saranno eseguite da un servizio esterno.