Analiza metylacji DNA w ostrym zespole wieńcowym i migotaniu przedsionków: badanie kliniczne DIANA

Badana populacja będzie obejmowała 20 zdrowych osób z grupy kontrolnej przyjętych do kontroli elektrokardiograficznej bez dalszych kardiologicznych, elektrokardiograficznych i klinicznych dowodów na patologie serca, 20 pacjentów z ACS i 40 pacjentów z ACS z AF lub bez AF, rekrutowanych w UTIC UOC of Cardiology w „AORN A. Cardarelli” (Neapol, Włochy) (dyrektor UOC: dr Ciro Mauro, jako kierownik działu badań w AORN Cardarelli; wspomagany przez dr Antonio Ruocco, dyrektora medycznego kardiologii).

Pacjenci z klinicznie rozpoznanym AF i OZW, w szczególności niestabilną dusznicą bolesną (UAP), ostrym zawałem mięśnia sercowego bez uniesienia odcinka ST (NSTEMI) oraz ostrym zawałem mięśnia sercowego z uniesieniem odcinka ST (STEMI), na podstawie wywiadu klinicznego, objawów, EKG, biomarkerów uszkodzenia kardiografia, angiografia wieńcowa, czynniki ryzyka i/lub inne badania kliniczne zgodnie z wytycznymi dla UAP/NSTEMI i STEMI będą rekrutowani w UTIC „AORN A. Cardarelli” (Neapol, Włochy). Wszyscy rekrutowani uczestnicy podpiszą pisemną świadomą zgodę na pobranie krwi do celów badawczych non-profit. Terapia farmakologiczna, informacje diagnostyczne i dane z badań klinicznych oraz historia medyczna będą zbierane z dokumentacji medycznej. Próbki krwi będą pobierane w ramach normalnej praktyki klinicznej bez pobierania dodatkowych próbek od pierwszego dnia przyjęcia przed zastosowaniem leków, takich jak heparyna i środki kontrastowe (> 90% próbek zostanie pobranych w ciągu doby wystąpienia ostrego zdarzenia). Pacjenci z pierwotnymi kardiomiopatiami, wrodzonymi wadami serca, chorobami zastawek, udarem mózgu, cukrzycą, chorobami autoimmunologicznymi, ostrymi infekcjami, przewlekłymi infekcjami płuc, POChP, rozedmą płuc, pylicą płucną, astmą, przewlekłym zapaleniem oskrzeli, gruźlicą, zapaleniem opłucnej, przewlekłą chorobą wątroby i nerek, nadczynnością tarczycy lub osoby, u których wystąpi ostra choroba przebiegająca z gorączką w ciągu 2 tygodni, zostaną wykluczone z badania.

Pobieranie pełnej krwi będzie przeprowadzane od pacjentów i kontroli podczas normalnej praktyki klinicznej. Próbki biologiczne zostaną natychmiast przetworzone i przechowywane w temperaturze +4°C w regionalnym biobanku referencyjnym U.O.C. Immunologii Klinicznej i Immunohematologii, Transfuzjologii i Immunologii Transplantacyjnej z dołączonym Jednolitym Regionalnym Laboratorium Referencyjnym ds. Immunologii Transplantacji Narządów (LIT) na Wydziale Chorób Wewnętrznych Uniwersytetu Campania „Luigi Vanvitelli” (Neapol, Włochy).

Łącznie 25 ml krwi żylnej obwodowej zostanie pobrane do probówek z EDTA i zwykle przetworzone w ciągu 1 godziny. Komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMNC) zostaną wyizolowane za pomocą gradientu Ficoll przy użyciu Histopaque®-1077 (Sigma-Aldrich) zgodnie z instrukcjami producenta.

Limfocyty T CD4+ i CD8+ zostaną oczyszczone z PBMC przy użyciu zestawu EasySep™ Human CD4+ T and Cell Isolation Kit oraz EasySep™ Human CD4+ T Cell Isolation Kit (STEMCELL Technologies), zaczynając odpowiednio od 5x107/ml PBMNC.

Genomowy DNA oczyszczonego podzbioru limfocytów od każdego uczestnika badania zostanie wyizolowany natychmiast po izolacji komórek przy użyciu zestawu DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen) zgodnie z protokołem producenta. Stężenie i czystość DNA zostaną określone za pomocą spektrofotometru NanoDrop ND-2000 (Thermo Scientific) poprzez ocenę stosunku absorbancji A260/A280 oraz sprawdzenie integralności DNA na 1% żelu agarozowym.

Sekwencjonowanie RRB i analizy bioinformatyczne będą wykonywane przez zewnętrzną usługę.