DNA-methyleringsanalyse ved akut koronarsyndrom og atrieflimren: DIANA klinisk forsøg

Undersøgelsespopulationen vil omfatte 20 raske kontroller indlagt til elektrokardiografisk kontrol uden yderligere kardiologiske, elektrokardiografiske og kliniske beviser for hjertepatologier, 20 patienter med ACS og 40 patienter med ACS påvirket eller ej af AF, rekrutteret ved UTIC i UOC of Cardiology ved "AORN A. Cardarelli" (Napoli, Italien) (direktør for UOC: Dr. Ciro Mauro, som afdelingsleder for undersøgelsen hos AORN Cardarelli; assisteret af Dr. Antonio Ruocco, medicinsk direktør for kardiologi).

Patienter med klinisk diagnosticeret AF og ACS, især ustabil angina pectoris (UAP), akut myokardieinfarkt uden ST-forhøjelse (NSTEMI) og akut myokardieinfarkt med ST-forhøjelse (STEMI), baseret på klinisk historie, symptomer, EKG, biomarkører for skade hjerte, koronar angiografi, risikofaktorer og/eller andre kliniske tests i henhold til retningslinjerne for UAP/NSTEMI og STEMI, vil blive rekrutteret ved UTIC i "AORN A. Cardarelli" (Napoli, Italien). Alle rekrutterede forsøgspersoner vil underskrive et skriftligt informeret samtykke til en blodprøvetagning til non-profit forskningsformål. Farmakologisk terapi, diagnostiske oplysninger og kliniske undersøgelsesdata og sygehistorie vil blive indsamlet fra lægejournaler. Blodprøver vil blive indsamlet under normal klinisk praksis uden at tage yderligere prøver fra den første indlæggelsesdag før brug af lægemidler såsom heparin og kontrastmidler (> 90 % af prøverne vil blive indsamlet inden for en dag efter akut hændelse). Patienter med primære kardiomyopatier, medfødt hjertesygdom, klapsygdomme, slagtilfælde, diabetes mellitus, autoimmune sygdomme, akutte infektioner, kroniske lungeinfektioner, KOL, emfysem, pneumokoniose, astma, kronisk bronkitis, tuberkulose, pleuritis, kronisk leversygdom og hyperthyroidisme eller forsøgspersoner, der vil gøre krav på en akut febril sygdom inden for 2 uger, vil blive udelukket fra undersøgelsen.

Indsamlingen af ​​fuldblod vil blive udført fra patienter og kontroller under normal klinisk praksis. Biologiske prøver vil straks blive behandlet og opbevaret ved +4 °C i den regionale referencebiobank i U.O.C. for klinisk immunologi og immunhæmatologi, transfusionsmedicin og transplantationsimmunologi med annekseret Single Regional Reference Laboratory for Organ Transplant Immunology (LIT) ved Institut for Intern Medicin ved Campania Universitet "Luigi Vanvitelli" (Napoli, Italien).

I alt 25 ml perifert veneblod vil blive opsamlet i EDTA-rør og normalt behandlet inden for 1 time. Perifere mononukleære blodceller (PBMNC'er) vil blive isoleret ved Ficoll-gradient ved hjælp af Histopaque®-1077 (Sigma-Aldrich) i henhold til producentens instruktioner.

CD4+ og CD8+ T-lymfocytter vil blive oprenset fra PBMC'er ved hjælp af EasySep™ Human CD4+ T- og celleisoleringskit og EasySep™ Human CD4+ T-celleisoleringskit (STEMCELL Technologies), startende med henholdsvis 5x107/mL PBMNC'er.

Genomisk DNA fra oprenset lymfocit-undersæt fra hver forsøgsdeltager vil blive isoleret umiddelbart efter celleisolering ved hjælp af DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen) i henhold til producentens protokol. DNA-koncentration og renhed vil blive bestemt ved at bruge NanoDrop spektrofotometer ND-2000 (Thermo Scientific) gennem evaluering af absorbansforholdet A260/A280 og DNA-integritet kontrolleret på 1 % agarosegel.

RRB-sekventering og bioinformatiske analyser vil blive udført af en ekstern tjeneste.