Analýza methylace DNA u akutního koronárního syndromu a fibrilace síní: Klinická studie DIANA

Studijní populace bude zahrnovat 20 zdravých kontrol přijatých k elektrokardiografické kontrole bez dalších kardiologických, elektrokardiografických a klinických důkazů srdečních patologií, 20 pacientů s AKS a 40 pacientů s AKS postiženým či nepostiženým FS, přijatých na UTIC UOC of Cardiology v "AORN A. Cardarelli" (Neapol, Itálie) (ředitel UOC: Dr. Ciro Mauro, jako vedoucí oddělení studie na AORN Cardarelli; asistuje Dr. Antonio Ruocco, lékařský ředitel kardiologie).

Pacienti s klinicky diagnostikovanou FS a AKS, zejména nestabilní anginou pectoris (UAP), akutním infarktem myokardu bez elevace ST (NSTEMI) a akutním infarktem myokardu s elevací ST (STEMI), na základě klinické anamnézy, symptomů, EKG, biomarkerů poškození srdeční, koronární angiografie, rizikové faktory a/nebo jiné klinické testy podle pokynů pro UAP/NSTEMI a STEMI, budou přijaty na UTIC "AORN A. Cardarelli" (Neapol, Itálie). Všechny rekrutované subjekty podepíší písemný informovaný souhlas s odběrem krve pro neziskové výzkumné účely. Farmakologická terapie, diagnostické informace a údaje z klinických vyšetření a anamnéza budou shromažďovány ze zdravotních záznamů. Vzorky krve budou odebírány během běžné klinické praxe bez odběru dalších vzorků od prvního dne přijetí před užitím léků jako je heparin a kontrastní látky (> 90 % vzorků bude odebráno během dne akutní příhody). Pacienti s primární kardiomyopatií, vrozenou srdeční vadou, chlopenními chorobami, mrtvicí, diabetes mellitus, autoimunitními chorobami, akutními infekcemi, chronickými plicními infekcemi, CHOPN, emfyzémem, pneumokoniózou, astmatem, chronickou bronchitidou, tuberkulózou, pleurisou, chronickým onemocněním jater a ledvin, hypertyreózou nebo jedinci, kteří budou tvrdit akutní horečnaté onemocnění do 2 týdnů, budou ze studie vyloučeni.

Odběry plné krve od pacientů a kontrol budou prováděny během běžné klinické praxe. Biologické vzorky budou okamžitě zpracovány a uloženy při +4 °C v regionální referenční biobance U.O.C. klinické imunologie a imunohematologie, transfuzního lékařství a transplantační imunologie s připojenou Jednotnou regionální referenční laboratoří pro orgánovou transplantační imunologii (LIT) na katedře vnitřního lékařství na univerzitě v Kampánii „Luigi Vanvitelli“ (Neapol, Itálie).

Celkem 25 ml periferní žilní krve bude odebráno do EDTA zkumavek a obvykle zpracováno do 1 hodiny. Mononukleární buňky periferní krve (PBMNC) budou izolovány gradientem Ficoll s použitím Histopaque®-1077 (Sigma-Aldrich) podle pokynů výrobce.

CD4+ a CD8+ T lymfocyty budou purifikovány z PBMC pomocí EasySep™ Human CD4+ T and Cell Isolation Kit a EasySep™ Human CD4+ T Cell Isolation Kit (STEMCELL Technologies), počínaje 5x107/ml PBMNC, v daném pořadí.

Genomová DNA purifikované podskupiny lymfocitů od každého účastníka studie bude izolována ihned po izolaci buněk pomocí soupravy DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen) podle protokolu výrobce. Koncentrace a čistota DNA bude stanovena pomocí spektrofotometru NanoDrop ND-2000 (Thermo Scientific) vyhodnocením poměru absorbance A260/A280 a integrity DNA zkontrolované na 1% agarózovém gelu.

Sekvenování RRB a bioinformatické analýzy budou prováděny externí službou.