Анализ метилирования ДНК при остром коронарном синдроме и фибрилляции предсердий: клиническое исследование DIANA

Исследуемая популяция будет включать 20 здоровых лиц контрольной группы, поступивших под электрокардиографический контроль без дополнительных кардиологических, электрокардиографических и клинических признаков кардиальной патологии, 20 пациентов с ОКС и 40 пациентов с ОКС, страдающих или не страдающих ФП, набранных в УТИЦ УПЦ кардиологии в «AORN A. Cardarelli» (Неаполь, Италия) (директор UOC: д-р Чиро Мауро, руководитель отдела исследования в AORN Cardarelli; ассистирует д-р Антонио Руокко, медицинский директор отделения кардиологии).

Пациенты с клинически диагностированной ФП и ОКС, в частности нестабильной стенокардией (НС), острым инфарктом миокарда без подъема сегмента ST (ИМбпST) и острым инфарктом миокарда с подъемом сегмента ST (ИМпST), на основании анамнеза, симптомов, ЭКГ, биомаркеров повреждения сердца, коронарографии, факторов риска и/или других клинических тестов в соответствии с рекомендациями для UAP/NSTEMI и STEMI, будут набраны в UTIC «AORN A. Cardarelli» (Неаполь, Италия). Все набранные субъекты подпишут письменное информированное согласие на забор крови для некоммерческих исследовательских целей. Фармакологическая терапия, диагностическая информация, данные клинического обследования и история болезни будут собираться из медицинских карт. Образцы крови будут собираться в ходе обычной клинической практики без взятия дополнительных образцов с первого дня госпитализации до применения таких препаратов, как гепарин и контрастные вещества (> 90% образцов будут собираться в течение дня острого события). Больные с первичными кардиомиопатиями, врожденными пороками сердца, пороками клапанов, инсультом, сахарным диабетом, аутоиммунными заболеваниями, острыми инфекциями, хроническими инфекциями легких, ХОБЛ, эмфиземой, пневмокониозом, бронхиальной астмой, хроническим бронхитом, туберкулезом, плевритом, хроническими заболеваниями печени и почек, гипертиреозом или субъекты, которые заявят о остром лихорадочном заболевании в течение 2 недель, будут исключены из исследования.

Сбор цельной крови будет проводиться у пациентов и контролей в ходе обычной клинической практики. Биологические образцы будут немедленно обработаны и сохранены при температуре +4 °C в региональном эталонном биобанке УПЦ. клинической иммунологии и иммуногематологии, трансфузионной медицины и трансплантационной иммунологии с присоединенной Единой региональной референс-лабораторией иммунологии трансплантации органов (ЛИТ) на кафедре внутренних болезней Университета Кампании «Луиджи Ванвителли» (Неаполь, Италия).

Всего 25 мл периферической венозной крови собирают в пробирки с ЭДТА и обычно обрабатывают в течение 1 часа. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMNC) выделяют градиентом Фиколла с использованием Histopaque®-1077 (Sigma-Aldrich) в соответствии с инструкциями производителя.

CD4+ и CD8+ Т-лимфоциты очищают от РВМС с использованием набора EasySep™ Human CD4+ T and Cell Isolation Kit и EasySep™ Human CD4+ T Cell Isolation Kit (STEMCELL Technologies), начиная с 5×107/мл PBMNC соответственно.

Геномная ДНК очищенной подгруппы лимфоцитов от каждого участника исследования будет выделена сразу же после выделения клеток с использованием набора DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen) в соответствии с протоколом производителя. Концентрация и чистота ДНК будут определяться с использованием спектрофотометра NanoDrop ND-2000 (Thermo Scientific) путем оценки отношения поглощения A260/A280 и проверки целостности ДНК на 1% агарозном геле.

Секвенирование RRB и биоинформатический анализ будут выполняться внешней службой.