Análisis de Metilación del ADN en Síndrome Coronario Agudo y Fibrilación Auricular: Ensayo Clínico DIANA

La población de estudio incluirá 20 controles sanos ingresados ​​en control electrocardiográfico sin más evidencia cardiológica, electrocardiográfica y clínica de patología cardiaca, 20 pacientes con SCA y 40 pacientes con SCA afectos o no de FA, reclutados en la UTIC de la UOC de Cardiología de la "AORN A. Cardarelli" (Nápoles, Italia) (Director de la UOC: Dr. Ciro Mauro, como Jefe de Unidad del estudio en AORN Cardarelli; asistido por el Dr. Antonio Ruocco, Director Médico de Cardiología).

Pacientes con diagnóstico clínico de FA y SCA, en particular angina de pecho inestable (UAP), infarto agudo de miocardio sin elevación del ST (NSTEMI) e infarto agudo de miocardio con elevación del ST (IAMCEST), según la historia clínica, los síntomas, el ECG, los biomarcadores de daño cardiaco, angiografía coronaria, factores de riesgo y/u otras pruebas clínicas según las guías para UAP/NSTEMI y STEMI, serán reclutados en la UTIC de la "AORN A. Cardarelli" (Nápoles, Italia). Todos los sujetos reclutados firmarán un consentimiento informado por escrito para una muestra de sangre con fines de investigación sin fines de lucro. La terapia farmacológica, la información de diagnóstico y los datos del examen clínico y el historial médico se recopilarán de los registros médicos. Las muestras de sangre se recogerán durante la práctica clínica normal sin tomar muestras adicionales desde el primer día de ingreso antes del uso de fármacos como heparina y agentes de contraste (> 90% de las muestras se recogerán dentro del día del evento agudo). Pacientes con miocardiopatías primarias, cardiopatías congénitas, enfermedades valvulares, ictus, diabetes mellitus, enfermedades autoinmunes, infecciones agudas, infecciones pulmonares crónicas, EPOC, enfisema, neumoconiosis, asma, bronquitis crónica, tuberculosis, pleuresía, enfermedad hepática y renal crónica, hipertiroidismo o los sujetos que reclamen una enfermedad febril aguda dentro de las 2 semanas, serán excluidos del estudio.

La recogida de sangre total se realizará de pacientes y controles durante la práctica clínica habitual. Las muestras biológicas serán inmediatamente procesadas y almacenadas a +4 °C en el biobanco de referencia comarcal de la U.O.C. de Inmunología Clínica e Inmunohematología, Medicina Transfusional e Inmunología de Trasplantes con el Laboratorio Único Regional de Referencia para Inmunología de Trasplantes de Órganos (LIT) anexo en el Departamento de Medicina Interna de la Universidad de Campania "Luigi Vanvitelli" (Nápoles, Italia).

Se recolectará un total de 25 ml de sangre venosa periférica en tubos con EDTA y, por lo general, se procesará en 1 hora. Las células mononucleares de sangre periférica (PBMNC) se aislarán mediante gradiente de Ficoll usando Histopaque®-1077 (Sigma-Aldrich) según las instrucciones del fabricante.

Los linfocitos T CD4+ y CD8+ se purificarán de las PBMC con el kit de aislamiento de células T y CD4+ humanas EasySep™ y el kit de aislamiento de células T CD4+ humanas EasySep™ (STEMCELL Technologies), comenzando con 5x107/mL de PBMNC, respectivamente.

El ADN genómico del subconjunto de linfocitos purificados de cada participante del estudio se aislará inmediatamente después del aislamiento celular utilizando el kit DNeasy Blood & Tissue (Qiagen) de acuerdo con el protocolo del fabricante. La concentración y la pureza del ADN se determinarán utilizando el espectrofotómetro NanoDrop ND-2000 (Thermo Scientific) a través de la evaluación de la relación de absorbancia A260/A280 y la integridad del ADN comprobada en gel de agarosa al 1 %.

RRB Secuenciación y análisis bioinformáticos serán realizados por un Servicio externo.