Análise de metilação do DNA na síndrome coronariana aguda e fibrilação atrial: ensaio clínico DIANA

A população do estudo incluirá 20 controles saudáveis ​​admitidos para controle eletrocardiográfico sem maiores evidências cardiológicas, eletrocardiográficas e clínicas de patologias cardíacas, 20 pacientes com SCA e 40 pacientes com SCA afetados ou não por FA, recrutados na UTIC da UOC de Cardiologia do "AORN A. Cardarelli" (Nápoles, Itália) (Diretor da UOC: Dr. Ciro Mauro, como Chefe da Unidade do estudo da AORN Cardarelli; assistido pelo Dr. Antonio Ruocco, Diretor Médico de Cardiologia).

Pacientes com diagnóstico clínico de FA e SCA, em particular angina pectoris instável (UAP), infarto agudo do miocárdio sem elevação ST (NSTEMI) e infarto agudo do miocárdio com elevação ST (STEMI), com base na história clínica, sintomas, ECG, biomarcadores de dano cardíaca, coronariografia, fatores de risco e/ou outros testes clínicos de acordo com as diretrizes para UAP/ NSTEMI e STEMI, serão recrutados na UTIC do "AORN A. Cardarelli" (Nápoles, Itália). Todos os indivíduos recrutados assinarão um consentimento informado por escrito para uma amostragem de sangue para fins de pesquisa sem fins lucrativos. A terapia farmacológica, as informações diagnósticas e os dados do exame clínico e do histórico médico serão coletados dos prontuários médicos. As amostras de sangue serão coletadas durante a prática clínica normal sem coleta de amostras adicionais a partir do primeiro dia de internação antes do uso de drogas como heparina e agentes de contraste (> 90% das amostras serão coletadas dentro de um dia de evento agudo). Pacientes com cardiomiopatias primárias, cardiopatias congênitas, doenças valvares, acidente vascular cerebral, diabetes mellitus, doenças autoimunes, infecções agudas, infecções pulmonares crônicas, DPOC, enfisema, pneumoconiose, asma, bronquite crônica, tuberculose, pleurisia, doença hepática e renal crônica, hipertireoidismo ou indivíduos que irão reclamar de uma doença febril aguda dentro de 2 semanas, serão excluídos do estudo.

A coleta de sangue total será realizada em pacientes e controles durante a prática clínica normal. As amostras biológicas serão imediatamente processadas e armazenadas a +4 °C no biobanco de referência regional da U.O.C. de Imunologia Clínica e Imunohematologia, Medicina Transfusional e Imunologia de Transplantes com o Laboratório de Referência Regional Único anexo para Imunologia de Transplante de Órgãos (LIT) no Departamento de Medicina Interna da Universidade da Campânia "Luigi Vanvitelli" (Nápoles, Itália).

Um total de 25 mL de sangue venoso periférico será coletado em tubos de EDTA e geralmente processado em 1 hora. Células mononucleares de sangue periférico (PBMNCs) serão isoladas por gradiente de Ficoll usando Histopaque®-1077 (Sigma-Aldrich) de acordo com as instruções do fabricante.

Linfócitos T CD4+ e CD8+ serão purificados de PBMCs usando EasySep™ Human CD4+ T and Cell Isolation Kit e EasySep™ Human CD4+ T Cell Isolation Kit (STEMCELL Technologies), começando por 5x107/mL de PBMNCs, respectivamente.

O DNA genômico do subconjunto de linfócitos purificados de cada participante do estudo será isolado imediatamente após o isolamento celular usando o kit DNeasy Blood & Tissue (Qiagen) de acordo com o protocolo do fabricante. A concentração e a pureza do DNA serão determinadas por espectrofotômetro NanoDrop ND-2000 (Thermo Scientific) através da avaliação da razão de absorbância A260/A280 e verificação da integridade do DNA em gel de agarose 1%.

O sequenciamento RRB e as análises bioinformáticas serão realizados por um Serviço externo.