DNA-Methylierungsanalyse bei akutem Koronarsyndrom und Vorhofflimmern: Klinische Studie DIANA

Die Studienpopulation umfasst 20 gesunde Kontrollpersonen, die ohne weitere kardiologische, elektrokardiographische und klinische Nachweise von Herzpathologien zur elektrokardiographischen Kontrolle zugelassen wurden, 20 Patienten mit ACS und 40 Patienten mit ACS, die von Vorhofflimmern betroffen oder nicht betroffen sind und an der UTIC der UOC für Kardiologie rekrutiert werden „AORN A. Cardarelli“ (Neapel, Italien) (Direktor der UOC: Dr. Ciro Mauro, als Leiter der Abteilung der Studie bei AORN Cardarelli; assistiert von Dr. Antonio Ruocco, Ärztlicher Direktor der Kardiologie).

Patienten mit klinisch diagnostiziertem Vorhofflimmern und ACS, insbesondere instabiler Angina pectoris (UAP), akutem Myokardinfarkt ohne ST-Hebung (NSTEMI) und akutem Myokardinfarkt mit ST-Hebung (STEMI), basierend auf Anamnese, Symptomen, EKG, Biomarkern der Schädigung Herz-, Koronarangiographie, Risikofaktoren und/oder andere klinische Tests gemäß den Richtlinien für UAP/NSTEMI und STEMI, werden an der UTIC des „AORN A. Cardarelli“ (Neapel, Italien) rekrutiert. Alle rekrutierten Probanden unterzeichnen eine schriftliche Einverständniserklärung für eine Blutentnahme für gemeinnützige Forschungszwecke. Pharmakologische Therapie, diagnostische Informationen und klinische Untersuchungsdaten sowie die Krankengeschichte werden aus Krankenakten erfasst. Blutproben werden während der normalen klinischen Praxis ohne Entnahme zusätzlicher Proben ab dem ersten Tag der Aufnahme vor der Verwendung von Medikamenten wie Heparin und Kontrastmitteln entnommen (> 90 % der Proben werden innerhalb eines Tages nach dem akuten Ereignis entnommen). Patienten mit primären Kardiomyopathien, angeborenen Herzfehlern, Herzklappenerkrankungen, Schlaganfall, Diabetes mellitus, Autoimmunerkrankungen, akuten Infektionen, chronischen Lungeninfektionen, COPD, Emphysem, Pneumokoniose, Asthma, chronischer Bronchitis, Tuberkulose, Rippenfellentzündung, chronischer Leber- und Nierenerkrankung, Schilddrüsenüberfunktion oder Probanden, die innerhalb von 2 Wochen eine akute fieberhafte Erkrankung geltend machen, werden von der Studie ausgeschlossen.

Die Entnahme von Vollblut wird von Patienten und Kontrollpersonen während der normalen klinischen Praxis durchgeführt. Biologische Proben werden sofort verarbeitet und bei +4 °C in der regionalen Referenzbiobank der U.O.C. gelagert. für klinische Immunologie und Immunhämatologie, Transfusionsmedizin und Transplantationsimmunologie mit angeschlossenem Single Regional Reference Laboratory for Organ Transplant Immunology (LIT) an der Abteilung für Innere Medizin der Universität Kampanien „Luigi Vanvitelli“ (Neapel, Italien).

Insgesamt 25 ml peripheres venöses Blut werden in EDTA-Röhrchen gesammelt und in der Regel innerhalb von 1 Stunde verarbeitet. Periphere mononukleäre Blutzellen (PBMNCs) werden durch einen Ficoll-Gradienten unter Verwendung von Histopaque®-1077 (Sigma-Aldrich) gemäß den Anweisungen des Herstellers isoliert.

CD4+- und CD8+-T-Lymphozyten werden aus PBMCs mit dem EasySep™ Human CD4+ T and Cell Isolation Kit und dem EasySep™ Human CD4+ T Cell Isolation Kit (STEMCELL Technologies) gereinigt, beginnend mit 5 x 107/ml PBMNCs.

Genomische DNA der gereinigten Lymphozyten-Untergruppe von jedem Studienteilnehmer wird unmittelbar nach der Zellisolierung unter Verwendung des DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen) gemäß dem Protokoll des Herstellers isoliert. DNA-Konzentration und -Reinheit werden unter Verwendung des NanoDrop-Spektrophotometers ND-2000 (Thermo Scientific) durch die Bewertung des Absorptionsverhältnisses A260/A280 bestimmt und die DNA-Integrität wird auf 1 % Agarosegel überprüft.

RRB-Sequenzierung und bioinformatische Analysen werden von einem externen Dienst durchgeführt.