Antioksidanttiprobioottien antamisen vaikutus siemennesteen laatuun ja lisääntymistuloksiin.

Tämä on prospektiivinen satunnaistettu, yksikeskinen interventiotutkimus, jonka tarkoituksena on arvioida kahden probiootin yhdistelmän vaikutusta siemennesteen laatuun ja myöhempään hedelmättömien potilaiden lisääntymistuloksiin. Koska kyseessä on ravintolisä, meihin sovelletaan biolääketieteen asetusta eikä kliinisiä tutkimuksia koskevaa asetusta, kuten Espanjan lääkevirasto on jo luokitellut. Tutkimus suoritetaan hedelmättömillä potilailla IVIRMA Valencian klinikalla kahden vuoden ajan suunniteltujen interventioiden ja tiedonkeruun ja -analyysin suorittamiseksi. Vertailupopulaatio sisältää hedelmättömät potilaat, jotka tulevat klinikalle IVF/ICSI-avusteiseen lisääntymishoitoon omilla tai luovutetuilla munasoluilla.

Potilaat tulevat klinikalle hoitoon. Jos heidän ominaisuudet ovat osallistumiskriteerien mukaiset, tutkimus esitellään ja selitetään heille ja heidän kumppaneilleen, jotta he voivat arvioida osallistumistaan ​​siihen. Jos he haluavat osallistua, he allekirjoittavat tietoisen suostumuslomakkeen, ja heidät satunnaistetaan tietokoneella laaditun satunnaisluettelon avulla kontrolliryhmään (joka saa lumelääkettä) tai hoitoryhmään (joka saa probioottiyhdistettä).

Potilaiden, joilla on nämä ominaisuudet, onnistumisprosentti, joka on vahvistettu klinikan omasta tietokannasta saadun historiallisen tiedon arvioinnin perusteella, on noin 35 % sykleistä omilla munasoluilla, jota voidaan käyttää pätevänä likiarvona. Yksipuolisessa kontrastikokeessa oletetaan alfa-virheen riskiksi 0,05 ja beetan (tilastollisen tehon) 80 %:n osoittamiseksi 15 %:n eron osoittamiseksi toimenpiteen ansiosta, tarvitsemme 134 tapausta per käsi ja olettaen, että 5 % menetykset seurannan aikana, tämä luku pyöristetään 140 tapaukseen tutkimusryhmää kohden, mikä tekee yhteensä 280 paria mukaan otettavaksi tutkimukseen.

Tutkimus on kaksoissokkoutettu: potilas, tutkija ja koko paikan päällä oleva henkilökunta (lukuun ottamatta tutkimuksen sairaanhoitajaa/koordinaattoria ja/tai apteekin assistenttia) pysyvät sokeina koko tutkimuksen ajan sen suhteen, mitä hoitoa kukin koehenkilö on saanut, mukaan lukien arvioiva lääkäri, embryologi ja muut ryhmän apujäsenet.

Koeryhmään nimetty uros aloittaa 50 %:n yhdistelmän kahdesta probiootista (Lactobacillus rhamnosus CECT8361 ja Bifidobacterium longum CECT7347) annoksella 109 CFU/päivä ensimmäisen käynnin samana päivänä. Probiootit toimittaa ADM Biopolis S.L. (Valencia, Espanja). Lyofilisoitujen probioottien kantaja on maltodekstriini ja seos kapseloidaan hypromelloosikapseleihin. Potilas ottaa yhden kapselin päivässä, mikä vastaa 109 cfu:n antamista päivässä. Potilaan tulee ottaa näitä probiootteja vähintään 21 päivää ennen avusteisen lisääntymisen sykliä. Potilaat, jotka saavat lumelääkettä, noudattavat samoja ohjeita. Molemmista potilasryhmistä otetaan siemennäyte heidän ensimmäisellä käynnillä siemennesteen peruslaadun arvioimiseksi, ja mikrobiomianalyysi tehdään 16S rRNA-sekvensoinnilla (ADM Biopolis) sen tilan määrittämiseksi. siemennestettä tutkimuksen aloituspisteessä. 21 päivän kuluttua potilaat määrätään tallettamaan toinen siemennestenäyte IVF/ICSI-syklin suorittamista varten. Tästä näytteestä analysoidaan myös sekä siemennesteen parametrit että mikrobiomi. Molemmista kerätyistä näytteistä saatuja arvoja verrataan, jotta voidaan havaita probiootin annon vaikutus siittiöiden laatuun ja sen mikrobipopulaatioon.

Tuoreet siemennestenäytteet arvioidaan normaalia toimintatapaa noudattaen spermiogrammin avulla, jossa kerätään tietoja tilavuudesta, pH:sta, siittiöiden pitoisuudesta, siittiöiden liikkuvuudesta, solujen elinkelpoisuudesta ja morfologiasta. Lisäksi DNA-fragmentaatioanalyysi suoritetaan käyttämällä Halosperm G2 -kittiä (Halotech), joka perustuu siittiöiden kromatiinidispersiotekniikkaan. Osa tuoreesta näytteestä jäädytetään upottamalla nestemäiseen typpeen ja säilytetään sitten -80 ºC:n pakastimessa ja lähetetään ADM Biopolikselle suorittamaan siemennesinäytteiden bakteeripopulaatioiden taksonominen tunnistaminen käyttämällä 16S rRNA-sekvensointia Ion Torrent -alustan kanssa. (Elämäteknologiat).

Kun IVF/ICSI on suoritettu ja munasolut on hedelmöitetty oikein, alkion valinta ja blastokystien siirto suoritetaan tavanomaisen lääketieteellisen käytännön mukaisesti naisen kohtuun, jotta ne voivat jatkaa kehitystään kohdussa.

Rekrytoinnin aikana pariskunta allekirjoittaa myös suostumuslomakkeen, jonka avulla tiimi voi kerätä tietoja syklin tuloksista sekä alkionkehityksen että raskauden ja synnytyksen aikana.

Määritetään tietokanta, jossa on analysoitavia muuttujia asetettujen tavoitteiden mukaisesti: siemennesteen laatuanalyysi, siittiöiden DNA:n fragmentointi, mikrobianalyysi, alkion kehitys, raskaus ja synnytys. Viedyt tiedot kodifioidaan asianmukaisesti potilaiden kliinisten ja henkilökohtaisten tietojen suojaamiseksi Espanjan tietosuojalain mukaisesti. Lopuksi, ennen tilastotutkimusta, tehdään kokeellinen tietoanalyysi, jolla tarkastellaan poimittujen tietojen laatua.

Tutkimuksen päämuuttuja on elävä syntyvyys sykliä kohden, joka määritellään niiden tapausten prosenttiosuutena, joissa avustettujen lisääntymismenetelmien täydellinen hoito suoritetaan kontrolli- tai kokeellisella siemennesteellä, joka onnistuu saamaan jälkeläisiä jokaista munasarjan stimulaatiosykliä kohti. opiskella.