Effetto della somministrazione di probiotici antiossidanti sulla qualità seminale e sui risultati riproduttivi.

Questo è uno studio di intervento prospettico randomizzato, unicentrico, volto a valutare l'effetto della combinazione di due probiotici sulla qualità seminale e sui successivi esiti riproduttivi di pazienti infertili. Trattandosi di un integratore alimentare, saremo soggetti al regolamento sulla biomedicina e non al regolamento sulle sperimentazioni cliniche, come già classificato dall'Agenzia spagnola del farmaco. Lo studio sarà condotto su pazienti infertili presso la clinica IVIRMA Valencia per due anni per completare gli interventi pianificati e la raccolta e l'analisi dei dati. La popolazione di riferimento comprende le pazienti infertili che si rivolgono alla clinica per il trattamento di fecondazione in vitro/ICSI con ovociti propri o donati.

I pazienti verranno in clinica per sottoporsi al trattamento. Se le loro caratteristiche sono in accordo con i criteri di inclusione, lo studio sarà presentato e spiegato a loro e ai loro partner in modo che possano valutare la loro partecipazione. Se desiderano partecipare, firmeranno un modulo di consenso informato e verranno randomizzati utilizzando un elenco di randomizzazione generato dal computer nel gruppo di controllo (che riceverà il placebo) o nel gruppo di trattamento (che riceverà il composto probiotico).

Il tasso di successo in pazienti con queste caratteristiche, confermato dalla valutazione delle informazioni storiche dal database della clinica, è di circa il 35% dei cicli che utilizzano i propri ovociti, che possono essere utilizzati come una valida approssimazione. In un test di contrasto unilaterale, assumendo un rischio di errore alfa di 0,05 e un beta (potenza statistica) dell'80%, per dimostrare una differenza del 15% grazie all'intervento, abbiamo bisogno di un numero di 134 casi per braccio e, ipotizzando perdite del 5% durante il follow-up, questo numero verrebbe arrotondato a 140 casi per gruppo di studio, per un totale di 280 coppie da includere nello studio.

Lo studio è in doppio cieco: il paziente, lo sperimentatore e tutto il personale del sito (ad eccezione dell'infermiere/coordinatore dello studio e/o dell'assistente farmaceutico) rimarranno ciechi per tutto il corso dello studio in merito al trattamento ricevuto da ciascun soggetto, incluso il medico valutatore, l'embriologo e altri membri ausiliari dell'équipe.

Il maschio assegnato al gruppo sperimentale inizierà ad assumere una combinazione al 50% dei due probiotici (Lactobacillus rhamnosus CECT8361 e Bifidobacterium longum CECT7347) alla dose di 109 CFU/die lo stesso giorno della prima visita. I probiotici saranno forniti dalla società ADM Biopolis S.L. (Valencia, Spagna). Il vettore dei probiotici liofilizzati è la maltodestrina e la miscela è incapsulata in capsule di ipromellosa. Il paziente assumerà una capsula al giorno corrispondente alla somministrazione di 109 cfu/die. Il paziente deve assumere questi probiotici per almeno 21 giorni prima di sottoporsi a un ciclo di riproduzione assistita. I pazienti che ricevono il placebo seguiranno le stesse istruzioni. Per entrambi i gruppi di pazienti, alla loro prima visita verrà raccolto un campione seminale per valutare la qualità basale del seme, così come verrà effettuata un'analisi del microbioma utilizzando il sequenziamento dell'rRNA 16S (da parte di ADM Biopolis) per determinare lo stato del seme all'inizio dello studio. Trascorsi i 21 giorni, alle pazienti verrà affidato il deposito di un secondo campione di seme per l'esecuzione del ciclo di fecondazione in vitro/ICSI. Anche questo campione verrà analizzato, sia per i parametri seminali che per il microbioma. I valori ottenuti da entrambi i campioni raccolti saranno confrontati per osservare l'effetto della somministrazione del probiotico sulla qualità dello sperma e della sua popolazione microbica.

I campioni di seme fresco saranno valutati mediante uno spermiogramma seguendo le procedure operative standard, in cui verranno raccolti dati su volume, pH, concentrazione di spermatozoi, mobilità degli spermatozoi, vitalità cellulare e morfologia. Inoltre, verrà effettuata un'analisi della frammentazione del DNA utilizzando il kit Halosperm G2 (Halotech) basato sulla tecnica della dispersione della cromatina spermatica. Una parte del campione fresco sarà congelata mediante immersione in azoto liquido e quindi conservata in un congelatore a -80ºC, e inviata ad ADM Biopolis per eseguire l'identificazione tassonomica delle popolazioni batteriche nei campioni di seme utilizzando il sequenziamento dell'rRNA 16S con la piattaforma Ion Torrent (Tecnologie della vita).

Una volta eseguita la fecondazione in vitro/ICSI e gli ovociti correttamente fecondati, si procederà alla selezione degli embrioni e al trasferimento della blastocisti nell'utero della donna, secondo la consueta pratica medica, in modo che possano continuare il loro sviluppo nell'utero.

Durante il reclutamento, la coppia firmerà anche un modulo di consenso che consentirà al team di raccogliere dati dai risultati del ciclo, sia durante lo sviluppo dell'embrione che durante la gravidanza e il parto.

Verrà definito un database con le variabili destinate ad essere analizzate secondo gli obiettivi prefissati: analisi della qualità del seme, frammentazione del DNA spermatico, analisi microbica, sviluppo embrionale, gestazione e parto. I dati esportati saranno debitamente codificati al fine di proteggere le informazioni cliniche e personali dei pazienti secondo la legge spagnola sulla protezione dei dati. Infine, e prima dello studio statistico, verrà effettuata un'analisi esplorativa dei dati per rivedere la qualità delle informazioni estratte.

La variabile principale dello studio è il tasso di nati vivi per ciclo definito come la percentuale di casi in cui viene effettuato un trattamento completo di riproduzione assistita con seme di controllo o sperimentale, che riescono ad ottenere prole per ogni ciclo di stimolazione ovarica compreso nel studio.