Effect van toediening van antioxidant-probiotica op de zaadkwaliteit en reproductieve resultaten.

Dit is een prospectieve gerandomiseerde, unicentrische interventiestudie gericht op het evalueren van het effect van de combinatie van twee probiotica op de zaadkwaliteit en de daaropvolgende reproductieve uitkomsten van onvruchtbare patiënten. Omdat het een voedingssupplement is, vallen we onder de Biomedicine Regulation en niet onder de Clinical Trials Regulation, zoals al geclassificeerd door het Spaanse Geneesmiddelenbureau. De studie zal gedurende twee jaar worden uitgevoerd bij onvruchtbare patiënten in de IVIRMA Valencia-kliniek om geplande interventies en gegevensverzameling en -analyse te voltooien. De referentiepopulatie omvat onvruchtbare patiënten die naar de kliniek komen voor IVF/ICSI-geassisteerde voortplantingsbehandeling met eigen of gedoneerde eicellen.

Patiënten komen naar de kliniek om de behandeling te ondergaan. Als hun kenmerken in overeenstemming zijn met de inclusiecriteria, wordt de studie gepresenteerd en uitgelegd aan hen en hun partners, zodat ze hun deelname eraan kunnen evalueren. Als ze willen deelnemen, ondertekenen ze een formulier voor geïnformeerde toestemming en worden ze gerandomiseerd met behulp van een door de computer gegenereerde randomisatielijst in de controlegroep (die een placebo krijgt) of de behandelingsgroep (die de probiotische verbinding krijgt).

Het slagingspercentage bij patiënten met deze kenmerken, bevestigd door de evaluatie van historische informatie uit de eigen database van de kliniek, is ongeveer 35% van de cycli met eigen oöcyten, wat kan worden gebruikt als een geldige benadering. In een unilaterale contrasttest, uitgaande van een risico op een alfafout van 0,05 en een bèta (statistische power) van 80%, om dankzij de interventie een verschil van 15% aan te tonen, hebben we een aantal van 134 gevallen per arm nodig en, ervan uitgaande verliezen van 5% tijdens de follow-up, zou dit aantal worden afgerond op 140 gevallen per studiegroep, wat een totaal van 280 paren maakt die in de studie moeten worden opgenomen.

Het onderzoek is dubbelblind: de patiënt, de onderzoeker en al het personeel van de locatie (met uitzondering van de onderzoeksverpleegkundige/-coördinator en/of apothekersassistent) blijven tijdens het verloop van het onderzoek geblindeerd wat betreft de behandeling die elke proefpersoon kreeg, inclusief de beoordelende arts, de embryoloog en andere hulpleden van het team.

De man die aan de experimentele groep is toegewezen, begint op dezelfde dag van het eerste bezoek met een 50% combinatie van de twee probiotica (Lactobacillus rhamnosus CECT8361 en Bifidobacterium longum CECT7347) in een dosis van 109 CFU/dag. De probiotica zullen worden geleverd door het bedrijf ADM Biopolis S.L. (Valencia, Spanje). De drager van gelyofiliseerde probiotica is maltodextrine en het mengsel is ingekapseld in hypromellosecapsules. De patiënt neemt dagelijks één capsule, overeenkomend met de toediening van 109 kve/dag. De patiënt moet deze probiotica ten minste 21 dagen gebruiken voordat hij een geassisteerde voortplantingscyclus ondergaat. Patiënten die de placebo krijgen, volgen dezelfde instructies. Voor beide groepen patiënten zal bij hun eerste bezoek een zaadmonster worden verzameld om de basislijnkwaliteit van het sperma te evalueren, evenals een microbioomanalyse zal worden uitgevoerd met behulp van 16S rRNA-sequencing (door ADM Biopolis) om de status van het sperma te bepalen. sperma op het startpunt van de studie. Na 21 dagen krijgen de patiënten de opdracht om een ​​tweede spermastaal af te geven om de IVF/ICSI-cyclus uit te voeren. Dit staal zal ook geanalyseerd worden, zowel op spermaparameters als op microbioom. Waarden verkregen uit beide verzamelde monsters zullen worden vergeleken om het effect van de toediening van het probioticum op de kwaliteit van het sperma en de microbiële populatie te observeren.

Verse spermamonsters zullen worden geëvalueerd door middel van een spermiogram volgens de standaardwerkwijzen, waarin gegevens worden verzameld over volume, pH, spermaconcentratie, spermamobiliteit, cellevensvatbaarheid en morfologie. Daarnaast zal een DNA-fragmentatieanalyse worden uitgevoerd met behulp van de Halosperm G2-kit (Halotech) op basis van de spermachromatine-dispersietechniek. Een deel van het verse monster wordt ingevroren door onderdompeling in vloeibare stikstof en vervolgens opgeslagen in een vriezer van -80ºC, en naar ADM Biopolis gestuurd om de bacteriepopulaties in de spermamonsters taxonomisch te identificeren met behulp van 16S rRNA-sequencing met het Ion Torrent-platform (Levenstechnologieën).

Nadat de IVF/ICSI is uitgevoerd en de eicellen correct zijn bevrucht, vindt de embryoselectie en de plaatsing van de blastocysten plaats volgens de gebruikelijke medische praktijk in de baarmoeder van de vrouw, zodat ze hun ontwikkeling in de baarmoeder kunnen voortzetten.

Tijdens de rekrutering ondertekent het paar ook een toestemmingsformulier waarmee het team gegevens kan verzamelen over de resultaten van de cyclus, zowel tijdens de embryo-ontwikkeling als tijdens de zwangerschap en de bevalling.

Er zal een databank worden gedefinieerd met de variabelen die bestemd zijn om te worden geanalyseerd volgens de vastgestelde doelstellingen: analyse van de kwaliteit van het sperma, DNA-fragmentatie van het sperma, microbiële analyse, embryo-ontwikkeling, dracht en bevalling. De geëxporteerde gegevens zullen naar behoren worden gecodificeerd om de klinische en persoonlijke informatie van de patiënten te beschermen volgens de Spaanse wetgeving inzake gegevensbescherming. Ten slotte zal voorafgaand aan het statistisch onderzoek een verkennende data-analyse worden uitgevoerd om de kwaliteit van de geëxtraheerde informatie te beoordelen.

De belangrijkste variabele van de studie is het aantal levendgeborenen per cyclus, gedefinieerd als het percentage gevallen waarin een volledige behandeling van geassisteerde voortplanting wordt uitgevoerd met controle- of experimenteel sperma, die erin slagen nakomelingen te verkrijgen voor elke cyclus van ovariële stimulatie die deel uitmaakt van de cyclus. studie.