Влияние введения антиоксидантных пробиотиков на качество спермы и репродуктивные результаты.

Это проспективное рандомизированное одноцентровое интервенционное исследование, направленное на оценку влияния комбинации двух пробиотиков на качество спермы и последующие репродуктивные исходы у пациентов с бесплодием. Поскольку это пищевая добавка, мы будем подчиняться Регламенту биомедицины, а не Регламенту клинических испытаний, который уже классифицирован Испанским агентством по лекарственным средствам. Исследование будет проводиться на пациентах с бесплодием в клинике IVIRMA Valencia в течение двух лет для завершения запланированных вмешательств, сбора и анализа данных. В референтную популяцию входят пациентки с бесплодием, обращающиеся в клинику для лечения методом вспомогательной репродукции ЭКО/ИКСИ с использованием собственных или донорских ооцитов.

Пациенты будут приходить в клинику для прохождения лечения. Если их характеристики соответствуют критериям включения, исследование будет представлено и объяснено им и их партнерам, чтобы они могли оценить свое участие в нем. Если они хотят участвовать, они подпишут форму информированного согласия и будут рандомизированы с использованием созданного компьютером списка рандомизации в контрольную группу (кто получит плацебо) или группу лечения (кто получит пробиотическое соединение).

Показатель успеха у пациенток с такими характеристиками, подтвержденный оценкой исторической информации из собственной базы данных клиники, составляет примерно 35% циклов с использованием собственных ооцитов, что можно использовать в качестве достоверного приближения. В одностороннем тесте с контрастированием, предполагая риск альфа-ошибки 0,05 и бета (статистическая мощность) 80%, чтобы продемонстрировать разницу в 15% благодаря вмешательству, нам нужно число 134 случаев на группу и, предполагая потери 5% во время последующего наблюдения, это число будет округлено до 140 случаев на группу исследования, что дает в общей сложности 280 пар, которые будут включены в исследование.

Испытание является двойным слепым: пациент, исследователь и весь персонал учреждения (за исключением медицинской сестры/координатора исследования и/или помощника фармацевта) останутся вслепую на протяжении всего испытания в отношении того, какое лечение получал каждый субъект, в том числе оценивающий врач, эмбриолог и другие вспомогательные члены бригады.

Мужчина, отнесенный к экспериментальной группе, начнет принимать 50% комбинацию двух пробиотиков (Lactobacillus rhamnosus CECT8361 и Bifidobacterium longum CECT7347) в дозе 109 КОЕ/день в тот же день первого визита. Пробиотики будет поставлять компания ADM Biopolis S.L. (Валенсия, Испания). Носителем лиофилизированных пробиотиков является мальтодекстрин, смесь инкапсулирована в капсулы из гипромеллозы. Пациент будет принимать по одной капсуле в день, что соответствует введению 109 КОЕ/день. Пациент должен принимать эти пробиотики не менее 21 дня перед циклом вспомогательной репродукции. Пациенты, получающие плацебо, будут следовать тем же инструкциям. Для обеих групп пациентов во время первого визита будет взят образец спермы для оценки исходного качества спермы, а также будет проведен анализ микробиома с использованием секвенирования 16S рРНК (компанией ADM Biopolis) для определения состояния спермы в начале исследования. Через 21 день пациентам будет назначено сдать второй образец спермы для проведения цикла ЭКО/ИКСИ. Этот образец также будет проанализирован как на параметры спермы, так и на микробиом. Значения, полученные из обоих собранных образцов, будут сравниваться, чтобы наблюдать влияние введения пробиотика на качество спермы и ее микробную популяцию.

Образцы свежей спермы будут оцениваться с помощью спермиограммы в соответствии со стандартными операционными процедурами, в ходе которых будут собираться данные об объеме, рН, концентрации сперматозоидов, подвижности сперматозоидов, жизнеспособности клеток и морфологии. Кроме того, будет проведен анализ фрагментации ДНК с использованием набора Halosperm G2 (Halotech) на основе метода дисперсии хроматина сперматозоидов. Часть свежего образца будет заморожена путем погружения в жидкий азот, а затем сохранена в морозильной камере при температуре -80ºC и отправлена ​​в ADM Biopolis для проведения таксономической идентификации бактериальных популяций в образцах спермы с использованием секвенирования 16S рРНК на платформе Ion Torrent. (технологии жизни).

После проведения ЭКО/ИКСИ и правильного оплодотворения яйцеклеток отбор эмбрионов и перенос бластоцисты будут осуществляться в соответствии с обычной медицинской практикой в ​​матку женщины, чтобы они могли продолжить свое развитие в матке.

Во время набора пара также подпишет форму согласия, позволяющую команде собирать данные по результатам цикла как во время развития эмбриона, так и во время беременности и родов.

Будет определена база данных с переменными, предназначенными для анализа в соответствии с поставленными задачами: анализ качества спермы, фрагментация ДНК спермы, микробный анализ, развитие эмбриона, беременность и роды. Экспортируемые данные будут должным образом кодифицированы для защиты клинической и личной информации пациентов в соответствии с испанским законом о защите данных. Наконец, перед статистическим исследованием будет проведен предварительный анализ данных для проверки качества извлеченной информации.

Основной переменной исследования является коэффициент живорождения за цикл, определяемый как процент случаев, в которых полный курс лечения вспомогательной репродукции проводится контрольной или экспериментальной спермой, которым удается получить потомство за каждый цикл стимуляции яичников, включенный в исследование. изучать.