Wpływ podawania probiotyku przeciwutleniającego na jakość nasienia i wyniki reprodukcyjne.

Jest to prospektywne, randomizowane, jednoośrodkowe badanie interwencyjne mające na celu ocenę wpływu połączenia dwóch probiotyków na jakość nasienia i późniejsze wyniki reprodukcyjne niepłodnych pacjentów. Ponieważ jest to suplement diety, będziemy podlegać rozporządzeniu w sprawie biomedycyny, a nie rozporządzeniu w sprawie badań klinicznych, jak już zostało sklasyfikowane przez Hiszpańską Agencję ds. Leków. Badanie będzie prowadzone na niepłodnych pacjentach w klinice IVIRMA Valencia przez dwa lata, aby zakończyć zaplanowane interwencje oraz zebrać i przeanalizować dane. Populacja referencyjna obejmuje niepłodne pacjentki zgłaszające się do poradni w celu leczenia wspomaganego rozrodu metodą IVF/ICSI z użyciem oocytów własnych lub dawców.

Pacjenci będą przychodzić do kliniki w celu poddania się zabiegowi. Jeśli ich cechy są zgodne z kryteriami włączenia, badanie zostanie przedstawione i wyjaśnione im i ich partnerom, aby mogli ocenić swój udział w nim. Jeśli chcą wziąć udział, podpiszą formularz świadomej zgody i zostaną losowo przydzieleni za pomocą wygenerowanej komputerowo listy randomizacyjnej do grupy kontrolnej (która otrzyma placebo) lub grupy terapeutycznej (która otrzyma związek probiotyczny).

Wskaźnik powodzenia u pacjentek o tych cechach, potwierdzony oceną informacji historycznych z własnej bazy danych kliniki, wynosi około 35% cykli z wykorzystaniem własnych oocytów, co można wykorzystać jako miarodajne przybliżenie. W jednostronnym teście kontrastowym, przy założeniu ryzyka błędu alfa 0,05 i beta (mocy statystycznej) 80%, aby wykazać różnicę 15% dzięki interwencji, potrzebujemy liczby 134 przypadków na ramię i przy założeniu, że 5% strat podczas obserwacji, liczbę tę zaokrągla się do 140 przypadków na grupę badaną, co daje w sumie 280 par objętych badaniem.

Badanie jest prowadzone metodą podwójnie ślepej próby: pacjent, badacz i cały personel ośrodka (z wyjątkiem pielęgniarki/koordynatora badania i/lub asystenta apteki) przez cały czas trwania badania nie będą wiedzieć, jakie leczenie otrzymał każdy uczestnik, w tym lekarz oceniający, embriolog i inni członkowie zespołu pomocniczego.

Mężczyzna przydzielony do grupy eksperymentalnej rozpocznie przyjmowanie 50% kombinacji dwóch probiotyków (Lactobacillus rhamnosus CECT8361 i Bifidobacterium longum CECT7347) w dawce 109 CFU/dzień w tym samym dniu pierwszej wizyty. Dostawcą probiotyków będzie firma ADM Biopolis S.L. (Walencja, Hiszpania). Nośnikiem liofilizowanych probiotyków jest maltodekstryna, a mieszanina zamknięta jest w kapsułkach hypromelozowych. Pacjent będzie przyjmował jedną kapsułkę dziennie, co odpowiada podaniu 109 jtk/dzień. Pacjent powinien przyjmować te probiotyki przez co najmniej 21 dni przed poddaniem się cyklowi wspomaganego rozrodu. Pacjenci otrzymujący placebo będą postępować zgodnie z tymi samymi instrukcjami. W przypadku obu grup pacjentów podczas pierwszej wizyty zostanie pobrane nasienie w celu oceny wyjściowej jakości nasienia, a także zostanie przeprowadzona analiza mikrobiomu za pomocą sekwencjonowania 16S rRNA (firmy ADM Biopolis) w celu określenia stanu nasienia nasienie w punkcie początkowym badania. Po 21 dniach pacjentki zostaną skierowane do oddania drugiej próbki nasienia w celu wykonania cyklu IVF/ICSI. Ta próbka również zostanie poddana analizie, zarówno pod kątem parametrów nasienia, jak i mikrobiomu. Wartości uzyskane z obu pobranych próbek zostaną porównane w celu zaobserwowania wpływu podania probiotyku na jakość plemników i ich populację drobnoustrojów.

Świeże próbki nasienia zostaną ocenione za pomocą spermiogramu zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi, w ramach którego zostaną zebrane dane dotyczące objętości, pH, koncentracji plemników, ruchliwości plemników, żywotności komórek i morfologii. Dodatkowo przeprowadzona zostanie analiza fragmentacji DNA przy użyciu zestawu Halosperm G2 (Halotech) w oparciu o technikę dyspersji chromatyny plemnikowej. Część świeżej próbki zostanie zamrożona przez zanurzenie w ciekłym azocie, a następnie przechowywana w zamrażarce -80ºC i wysłana do ADM Biopolis w celu przeprowadzenia identyfikacji taksonomicznej populacji bakterii w próbkach nasienia przy użyciu sekwencjonowania 16S rRNA za pomocą platformy Ion Torrent (technologie życia).

Po wykonaniu IVF/ICSI i prawidłowym zapłodnieniu oocytów, selekcja zarodka i transfer blastocysty zostaną przeprowadzone zgodnie ze zwykłą praktyką medyczną do macicy kobiety, aby mogły kontynuować swój rozwój w łonie matki.

Podczas rekrutacji para podpisze również formularz zgody, dzięki któremu zespół będzie mógł zbierać dane z wyników cyklu, zarówno podczas rozwoju zarodka, jak i podczas ciąży i porodu.

Zostanie zdefiniowana baza danych ze zmiennymi przeznaczonymi do analizy zgodnie z wyznaczonymi celami: analiza jakości nasienia, fragmentacja DNA plemników, analiza mikrobiologiczna, rozwój zarodka, ciąża i poród. Wyeksportowane dane zostaną należycie skodyfikowane w celu ochrony danych klinicznych i danych osobowych pacjentów zgodnie z hiszpańskim prawem o ochronie danych. Na koniec, przed badaniem statystycznym, zostanie przeprowadzona eksploracyjna analiza danych w celu przeglądu jakości uzyskanych informacji.

Główną zmienną badania jest wskaźnik urodzeń żywych na cykl, zdefiniowany jako odsetek przypadków, w których przeprowadzono pełne leczenie wspomaganego rozrodu nasieniem kontrolnym lub doświadczalnym, którym udaje się uzyskać potomstwo w każdym cyklu stymulacji jajników wchodzącym w skład badanie.