Efeito da administração de probióticos antioxidantes na qualidade seminal e resultados reprodutivos.

Este é um estudo de intervenção prospectivo, randomizado e unicêntrico com o objetivo de avaliar o efeito da combinação de dois probióticos na qualidade seminal e subsequentes resultados reprodutivos de pacientes inférteis. Por se tratar de um suplemento alimentar, estaremos sujeitos ao Regulamento de Biomedicina e não ao Regulamento de Ensaios Clínicos, conforme já classificado pela Agência Espanhola de Medicamentos. O estudo será conduzido em pacientes inférteis na clínica IVIRMA Valencia por dois anos para completar as intervenções planejadas e coleta e análise de dados. A população de referência inclui pacientes inférteis que chegam à clínica para tratamento de reprodução assistida por fertilização in vitro/ICSI com oócitos próprios ou doados.

Os pacientes virão à clínica para se submeter ao tratamento. Se suas características estiverem de acordo com os critérios de inclusão, o estudo será apresentado e explicado a elas e seus parceiros para que avaliem sua participação no mesmo. Se desejarem participar, assinarão um termo de consentimento informado e serão randomizados usando uma lista de randomização gerada por computador no grupo controle (que receberá placebo) ou no grupo de tratamento (que receberá o composto probiótico).

A taxa de sucesso em pacientes com essas características, confirmada pela avaliação de informações históricas do banco de dados da própria clínica, é de aproximadamente 35% dos ciclos com ovócitos próprios, o que pode ser usado como uma aproximação válida. Em um teste de contraste unilateral, assumindo um risco de erro alfa de 0,05 e um beta (poder estatístico) de 80%, para demonstrar uma diferença de 15% graças à intervenção, precisamos de um número de 134 casos por braço e, assumindo perdas de 5% durante o seguimento, esse número seria arredondado para 140 casos por grupo de estudo, o que perfaz um total de 280 casais a serem incluídos no estudo.

O estudo é duplo-cego: o paciente, o investigador e todo o pessoal do centro (com exceção da enfermeira/coordenador do estudo e/ou assistente de farmácia) permanecerão cegos durante todo o estudo quanto ao tratamento que cada participante recebeu, incluindo o médico avaliador, o embriologista e demais auxiliares da equipe.

O macho designado para o grupo experimental começará a tomar uma combinação de 50% dos dois probióticos (Lactobacillus rhamnosus CECT8361 e Bifidobacterium longum CECT7347) na dose de 109 UFC/dia no mesmo dia da primeira visita. Os probióticos serão fornecidos pela empresa ADM Biopolis S.L. (Valência, Espanha). O carreador dos probióticos liofilizados é a maltodextrina e a mistura é encapsulada em cápsulas de hipromelose. O paciente tomará uma cápsula diária correspondente à administração de 109 ufc/dia. O paciente deve tomar esses probióticos por pelo menos 21 dias antes de passar por um ciclo de reprodução assistida. Os pacientes que recebem o placebo seguirão as mesmas instruções. Para ambos os grupos de pacientes, uma amostra seminal será coletada em sua primeira visita para avaliar a qualidade basal do sêmen, bem como uma análise do microbioma será realizada usando o sequenciamento de 16S rRNA (da ADM Biopolis) para determinar o status do sêmen no ponto de partida do estudo. Após 21 dias, os pacientes serão encaminhados para depositar uma segunda amostra de sêmen para realizar o ciclo FIV/ICSI. Esta amostra também será analisada, tanto para parâmetros de sêmen quanto para microbioma. Os valores obtidos de ambas as amostras coletadas serão comparados para observar o efeito da administração do probiótico na qualidade do esperma e sua população microbiana.

Amostras de sêmen fresco serão avaliadas por meio de espermograma seguindo os procedimentos operacionais padrão, no qual serão coletados dados de volume, pH, concentração espermática, mobilidade espermática, viabilidade celular e morfologia. Além disso, uma análise de fragmentação de DNA será realizada usando o kit Halosperm G2 (Halotech) com base na técnica de dispersão da cromatina espermática. Uma parte da amostra fresca será congelada por submersão em nitrogênio líquido e posteriormente armazenada em freezer a -80ºC, e enviada à ADM Biopolis para realizar a identificação taxonômica das populações bacterianas nas amostras de sêmen usando sequenciamento 16S rRNA com a plataforma Ion Torrent (Lifetechnologies).

Uma vez realizada a fertilização in vitro/ICSI e os oócitos devidamente fertilizados, a seleção do embrião e a transferência do blastocisto serão realizadas de acordo com a prática médica usual para o útero da mulher, para que possam continuar seu desenvolvimento no útero.

Durante o recrutamento, o casal também assinará um termo de consentimento permitindo que a equipe colete dados dos resultados do ciclo, tanto durante o desenvolvimento do embrião quanto durante a gravidez e o parto.

Será definido um banco de dados com as variáveis ​​destinadas a serem analisadas de acordo com os objetivos definidos: análise da qualidade do sêmen, fragmentação do DNA espermático, análise microbiana, desenvolvimento do embrião, gestação e parto. Os dados exportados serão devidamente codificados para proteger os dados clínicos e pessoais dos pacientes de acordo com a lei espanhola de proteção de dados. Finalmente, e antes do estudo estatístico, será realizada uma análise exploratória dos dados para avaliar a qualidade da informação extraída.

A principal variável do estudo é a taxa de nascidos vivos por ciclo definida como a porcentagem de casos em que é realizado um tratamento completo de reprodução assistida com sêmen controle ou experimental, que conseguem obter descendentes para cada ciclo de estimulação ovariana incluído no estudar.