Effekt av antioxidant probiotisk administrering på seminalkvalitet och reproduktionsresultat.

Detta är en prospektiv randomiserad, unicentrisk interventionsstudie som syftar till att utvärdera effekten av kombinationen av två probiotika på sädeskvaliteten och efterföljande reproduktionsresultat hos infertila patienter. Eftersom det är ett kosttillskott kommer vi att omfattas av förordningen om biomedicin och inte förordningen om kliniska prövningar, som redan klassificerats av den spanska läkemedelsmyndigheten. Studien kommer att genomföras på infertila patienter på IVIRMA Valencia-kliniken under två år för att slutföra planerade ingrepp och datainsamling och analys. Referenspopulationen inkluderar infertila patienter som kommer till kliniken för IVF/ICSI assisterad reproduktionsbehandling med egna eller donerade oocyter.

Patienterna kommer till kliniken för att genomgå behandlingen. Om deras egenskaper överensstämmer med inklusionskriterierna kommer studien att presenteras och förklaras för dem och deras partners så att de kan utvärdera sitt deltagande i den. Om de vill delta kommer de att underteckna ett informerat samtycke, och de kommer att randomiseras med hjälp av en datorgenererad randomiseringslista till kontrollgruppen (som kommer att få placebo) eller behandlingsgruppen (som kommer att få den probiotiska föreningen).

Framgångsfrekvensen hos patienter med dessa egenskaper, bekräftad av utvärderingen av historisk information från klinikens egen databas, är cirka 35 % av cyklerna med egna oocyter, vilket kan användas som en giltig approximation. I ett ensidigt kontrasttest, med antagande av en risk för ett alfafel på 0,05 och en beta (statistisk styrka) på 80 %, för att påvisa en skillnad på 15 % tack vare interventionen, behöver vi ett antal av 134 fall per arm och, förutsatt att förluster på 5 % under uppföljningen, skulle detta antal avrundas till 140 fall per studiegrupp, vilket gör att totalt 280 par ska ingå i studien.

Försöket är dubbelblind: patienten, utredaren och all personal på plats (med undantag för försökssjuksköterskan/koordinatorn och/eller apoteksassistenten) kommer att förbli blinda under hela försökets gång om vilken behandling varje försöksperson fick, inklusive den utvärderande läkaren, embryologen och andra hjälpmedlemmar i teamet.

Hanen som tilldelas experimentgruppen kommer att börja ta en 50 % kombination av de två probiotika (Lactobacillus rhamnosus CECT8361 och Bifidobacterium longum CECT7347) i en dos av 109 CFU/dag samma dag som det första besöket. Probiotikan kommer att levereras av företaget ADM Biopolis S.L. (Valencia, Spanien). Bäraren av lyofiliserade probiotika är maltodextrin och blandningen är inkapslad i hypromelloskapslar. Patienten kommer att ta en kapsel dagligen motsvarande administrering av 109 cfu/dag. Patienten ska ta dessa probiotika i minst 21 dagar innan han genomgår en cykel med assisterad befruktning. Patienter som får placebo kommer att följa samma instruktioner. För båda grupperna av patienter kommer ett sädesprov att samlas in vid deras första besök för att utvärdera spermans baslinjekvalitet, liksom en mikrobiomanalys kommer att utföras med 16S rRNA-sekvensering (av ADM Biopolis) för att fastställa statusen för sperma vid studiens startpunkt. Efter 21 dagar kommer patienterna att utses att deponera ett andra spermaprov för att utföra IVF/ICSI-cykeln. Detta prov kommer också att analyseras, både för spermaparametrar och mikrobiom. Värden erhållna från båda de insamlade proverna kommer att jämföras för att observera effekten av administreringen av probiotika på kvaliteten på spermier och dess mikrobiella population.

Färska spermaprover kommer att utvärderas med hjälp av ett spermiogram enligt standardförfarandena, där data kommer att samlas in om volym, pH, spermiekoncentration, spermierörlighet, cellviabilitet och morfologi. Dessutom kommer en DNA-fragmenteringsanalys att utföras med användning av Halosperm G2-kit (Halotech) baserat på spermkromatin-dispersionstekniken. En del av det färska provet kommer att frysas genom nedsänkning i flytande kväve och sedan lagras i en -80ºC frys, och skickas till ADM Biopolis för att utföra taxonomisk identifiering av bakteriepopulationerna i spermaproverna med hjälp av 16S rRNA-sekvensering med Ion Torrent-plattformen (Livsteknik).

När IVF/ICSI har utförts och oocyterna har blivit korrekt befruktade, kommer embryoselektion och blastocystöverföring att utföras enligt sedvanlig medicinsk praxis till kvinnans livmoder, så att de kan fortsätta sin utveckling i livmodern.

Under rekryteringen kommer paret också att underteckna ett samtyckesformulär som tillåter teamet att samla in data från resultaten av cykeln, både under embryoutveckling och under graviditeten och förlossningen.

En databas kommer att definieras med de variabler som är avsedda att analyseras enligt de uppsatta målen: analys av spermakvalitet, spermie-DNA-fragmentering, mikrobiell analys, embryonutveckling, dräktighet och förlossning. De exporterade uppgifterna kommer att kodifieras vederbörligen för att skydda patienternas kliniska och personliga information enligt den spanska dataskyddslagen. Slutligen, och inför den statistiska studien, kommer en explorativ dataanalys att genomföras för att granska kvaliteten på den utvunna informationen.

Studiens huvudvariabel är antalet levande födslar per cykel definierad som andelen fall där en fullständig behandling av assisterad befruktning utförs med kontroll- eller experimentsperma, som lyckas få avkomma för varje cykel av äggstocksstimulering som ingår i studie.