Wirkung der antioxidativen probiotischen Verabreichung auf die Samenqualität und die Fortpflanzungsergebnisse.

Dies ist eine prospektive, randomisierte, unizentrische Interventionsstudie, die darauf abzielt, die Wirkung der Kombination zweier Probiotika auf die Samenqualität und die nachfolgenden reproduktiven Ergebnisse von unfruchtbaren Patientinnen zu bewerten. Da es sich um ein Nahrungsergänzungsmittel handelt, unterliegen wir der Biomedizinverordnung und nicht der Verordnung über klinische Studien, wie sie bereits von der spanischen Arzneimittelbehörde eingestuft wurde. Die Studie wird zwei Jahre lang an unfruchtbaren Patientinnen in der IVIRMA-Klinik in Valencia durchgeführt, um geplante Eingriffe sowie die Datenerfassung und -analyse abzuschließen. Die Referenzpopulation umfasst unfruchtbare Patientinnen, die zur IVF/ICSI-gestützten Reproduktionsbehandlung mit eigenen oder gespendeten Eizellen in die Klinik kommen.

Die Patienten kommen in die Klinik, um sich der Behandlung zu unterziehen. Wenn ihre Eigenschaften den Einschlusskriterien entsprechen, wird ihnen und ihren Partnern die Studie vorgestellt und erklärt, damit sie ihre Teilnahme daran bewerten können. Wenn sie teilnehmen möchten, unterschreiben sie eine Einverständniserklärung und werden anhand einer computergenerierten Randomisierungsliste in die Kontrollgruppe (die ein Placebo erhält) oder die Behandlungsgruppe (die das probiotische Präparat erhält) randomisiert.

Die Erfolgsquote bei Patientinnen mit diesen Merkmalen, bestätigt durch die Auswertung historischer Informationen aus der klinikeigenen Datenbank, liegt bei ca. 35 % der Zyklen mit eigenen Eizellen, was als valide Näherung herangezogen werden kann. Um bei einem einseitigen Kontrasttest bei einem Alpha-Fehler-Risiko von 0,05 und einem Beta (statistische Power) von 80 % einen Unterschied von 15 % durch die Intervention nachzuweisen, benötigen wir eine Fallzahl von 134 pro Arm und angenommen Verlusten von 5 % während der Nachbeobachtung würde diese Zahl auf 140 Fälle pro Studiengruppe gerundet, was eine Gesamtzahl von 280 in die Studie einzuschließenden Paaren ergibt.

Die Studie ist doppelblind: Der Patient, der Prüfarzt und alle Mitarbeiter des Zentrums (mit Ausnahme der Studienkrankenschwester/-koordinatorin und/oder der Apothekenassistentin) bleiben während des gesamten Verlaufs der Studie darüber verblindet, welche Behandlung jeder Proband erhalten hat, einschließlich der beurteilende Arzt, der Embryologe und andere Hilfsmitglieder des Teams.

Der der Versuchsgruppe zugewiesene Mann beginnt am selben Tag des ersten Besuchs mit der Einnahme einer 50%igen Kombination der beiden Probiotika (Lactobacillus rhamnosus CECT8361 und Bifidobacterium longum CECT7347) in einer Dosis von 109 CFU/Tag. Die Probiotika werden von der Firma ADM Biopolis S.L. geliefert. (Valencia, Spanien). Der Träger von lyophilisierten Probiotika ist Maltodextrin und die Mischung ist in Hypromellose-Kapseln eingekapselt. Der Patient nimmt täglich eine Kapsel entsprechend der Verabreichung von 109 cfu/Tag ein. Der Patient sollte diese Probiotika mindestens 21 Tage lang einnehmen, bevor er sich einem Zyklus der assistierten Reproduktion unterzieht. Patienten, die das Placebo erhalten, befolgen die gleichen Anweisungen. Bei beiden Patientengruppen wird bei ihrem ersten Besuch eine Samenprobe entnommen, um die Ausgangsqualität des Samens zu bewerten, und es wird eine Mikrobiomanalyse mit 16S-rRNA-Sequenzierung (von ADM Biopolis) durchgeführt, um den Status des Samens zu bestimmen Samen am Anfang der Studie. Nach 21 Tagen werden die Patienten beauftragt, eine zweite Samenprobe abzugeben, um den IVF/ICSI-Zyklus durchzuführen. Diese Probe wird ebenfalls analysiert, sowohl auf Samenparameter als auch auf das Mikrobiom. Die aus beiden gesammelten Proben erhaltenen Werte werden verglichen, um die Wirkung der Verabreichung des Probiotikums auf die Qualität der Spermien und ihre mikrobielle Population zu beobachten.

Frische Samenproben werden anhand eines Spermiogramms gemäß den Standardarbeitsanweisungen bewertet, in denen Daten zu Volumen, pH-Wert, Spermienkonzentration, Spermienmobilität, Zelllebensfähigkeit und Morphologie erhoben werden. Zusätzlich wird eine DNA-Fragmentierungsanalyse unter Verwendung des Halosperm G2-Kits (Halotech) basierend auf der Sperma-Chromatin-Dispersionstechnik durchgeführt. Ein Teil der frischen Probe wird durch Eintauchen in flüssigen Stickstoff eingefroren und anschließend in einem Gefrierschrank bei -80 °C gelagert und an ADM Biopolis gesendet, um die taxonomische Identifizierung der Bakterienpopulationen in den Samenproben mithilfe der 16S-rRNA-Sequenzierung mit der Ion Torrent-Plattform durchzuführen (Lebenstechnologien).

Nach Durchführung der IVF/ICSI und korrekter Befruchtung der Eizellen erfolgt die Embryoselektion und der Blastozystentransfer nach üblicher medizinischer Praxis in die Gebärmutter der Frau, damit sie sich im Mutterleib weiter entwickeln können.

Während der Rekrutierung unterzeichnet das Paar auch eine Einwilligungserklärung, die es dem Team ermöglicht, Daten aus den Ergebnissen des Zyklus zu sammeln, sowohl während der Embryonalentwicklung als auch während der Schwangerschaft und der Geburt.

Es wird eine Datenbank mit den Variablen definiert, die gemäß den gesetzten Zielen analysiert werden sollen: Analyse der Samenqualität, Spermien-DNA-Fragmentierung, mikrobielle Analyse, Embryonalentwicklung, Trächtigkeit und Geburt. Die exportierten Daten werden ordnungsgemäß verschlüsselt, um die klinischen und persönlichen Daten der Patienten gemäß dem spanischen Datenschutzgesetz zu schützen. Schließlich und vor der statistischen Untersuchung wird eine explorative Datenanalyse durchgeführt, um die Qualität der extrahierten Informationen zu überprüfen.

Die Hauptvariable der Studie ist die Lebendgeburtenrate pro Zyklus, definiert als der Prozentsatz der Fälle, in denen eine vollständige Behandlung der assistierten Reproduktion mit Kontroll- oder Versuchssperma durchgeführt wird, die es schaffen, Nachkommen für jeden Zyklus der in der Ovarialstimulation enthaltenen zu erhalten lernen.