Vliv podávání antioxidačních probiotik na kvalitu semene a reprodukční výsledky.

Jedná se o prospektivní randomizovanou unicentrickou intervenční studii zaměřenou na hodnocení účinku kombinace dvou probiotik na kvalitu semene a následné reprodukční výsledky neplodných pacientek. Jelikož se jedná o potravinový doplněk, budeme podléhat nařízení o biomedicíně a nikoli nařízení o klinických hodnoceních, jak již klasifikovala španělská léková agentura. Studie bude prováděna na neplodných pacientkách na klinice IVIRMA Valencia po dobu dvou let, aby byly dokončeny plánované intervence a sběr dat a analýza. Referenční populace zahrnuje neplodné pacientky přicházející na kliniku pro léčbu asistované reprodukce IVF/ICSI s vlastními nebo darovanými oocyty.

Pacienti přijdou na kliniku, aby podstoupili léčbu. Pokud jsou jejich charakteristiky v souladu s kritérii pro zařazení, bude jim a jejich partnerům studie představena a vysvětlena, aby mohli zhodnotit svou účast v ní. Pokud se chtějí zúčastnit, podepíší informovaný souhlas a budou randomizováni pomocí počítačem generovaného randomizačního seznamu do kontrolní skupiny (která dostane placebo) nebo léčebné skupiny (která dostane probiotickou sloučeninu).

Úspěšnost u pacientek s těmito charakteristikami, potvrzená vyhodnocením historických informací z vlastní databáze kliniky, je přibližně 35 % cyklů s použitím vlastních oocytů, což lze použít jako platnou aproximaci. V jednostranném kontrastním testu, za předpokladu rizika chyby alfa 0,05 a beta (statistická síla) 80 %, k prokázání rozdílu 15 % díky intervenci potřebujeme počet 134 případů na paži a za předpokladu ztráty 5 % během sledování, toto číslo by bylo zaokrouhleno na 140 případů na studijní skupinu, což znamená, že do studie bude zahrnuto celkem 280 párů.

Zkouška je dvojitě zaslepená: pacient, zkoušející a veškerý personál na místě (s výjimkou zkušební sestry/koordinátorky a/nebo lékárnického asistenta) zůstanou v průběhu studie zaslepeni, pokud jde o to, jakou léčbu každý subjekt dostal, včetně posuzující lékař, embryolog a další pomocní členové týmu.

Samec zařazený do experimentální skupiny začne užívat 50% kombinaci dvou probiotik (Lactobacillus rhamnosus CECT8361 a Bifidobacterium longum CECT7347) v dávce 109 CFU/den ve stejný den první návštěvy. Probiotika bude dodávat společnost ADM Biopolis S.L. (Valencia, Španělsko). Nosičem lyofilizovaných probiotik je maltodextrin a směs je zapouzdřena do hypromelózových kapslí. Pacient bude užívat jednu kapsli denně, což odpovídá podávání 109 cfu/den. Pacient by měl tato probiotika užívat alespoň 21 dní před tím, než podstoupí cyklus asistované reprodukce. Pacienti, kteří dostávají placebo, se budou řídit stejnými pokyny. U obou skupin pacientů bude při první návštěvě odebrán vzorek semene, aby se vyhodnotila výchozí kvalita spermatu, a také bude provedena analýza mikrobiomu pomocí sekvenování 16S rRNA (od společnosti ADM Biopolis), aby se určil stav sperma na začátku studie. Po 21 dnech budou pacienti jmenováni k uložení druhého vzorku spermatu za účelem provedení cyklu IVF/ICSI. Tento vzorek bude také analyzován, a to jak na parametry spermatu, tak na mikrobiom. Hodnoty získané z obou odebraných vzorků budou porovnány za účelem sledování vlivu podání probiotika na kvalitu spermií a jejich mikrobiální populaci.

Vzorky čerstvého spermatu budou hodnoceny pomocí spermiogramu podle standardních operačních postupů, ve kterých budou sbírány údaje o objemu, pH, koncentraci spermií, pohyblivosti spermií, viability buněk a morfologii. Kromě toho bude provedena analýza fragmentace DNA pomocí sady Halosperm G2 (Halotech) založené na technice disperze chromatinu spermatu. Část čerstvého vzorku bude zmražena ponořením do tekutého dusíku a poté uskladněna v mrazáku -80 °C a odeslána do ADM Biopolis k provedení taxonomické identifikace bakteriálních populací ve vzorcích spermatu pomocí sekvenování 16S rRNA s platformou Ion Torrent (Životní technologie).

Po provedení IVF/ICSI a správném oplodnění oocytů se provede selekce embrya a přenos blastocysty podle obvyklé lékařské praxe do dělohy ženy, aby mohly pokračovat ve svém vývoji v děloze.

Během náboru pár také podepíše formulář souhlasu, který týmu umožní sbírat data z výsledků cyklu, a to jak během vývoje embrya, tak během těhotenství a porodu.

Bude definována databáze s proměnnými určenými k analýze podle stanovených cílů: analýza kvality spermatu, fragmentace DNA spermatu, mikrobiální analýza, vývoj embrya, gestace a porod. Exportovaná data budou řádně kodifikována, aby byly chráněny klinické a osobní informace pacientů podle španělského zákona o ochraně dat. Nakonec a před statistickou studií bude provedena průzkumná analýza dat za účelem posouzení kvality extrahovaných informací.

Hlavní proměnnou studie je živá porodnost na cyklus definovaná jako procento případů, kdy je provedena kompletní léčba asistované reprodukce kontrolním nebo experimentálním spermatem, kterým se podaří získat potomky pro každý cyklus ovariální stimulace zařazený do studie.