Onko synnynnäisten CD8+ T-solujen ja tyrosiinikinaasi-inhibiittoriresistenssimutaatioiden evoluution välillä yhteys Phi+-hematologisissa pahanlaatuisissa kasvaimissa? (TIPHI)

Ennen ensimmäisten kohdennettujen imatinibihoitojen tuloa vuonna 2000 krooninen myelooinen leukemia (CML) oli pelätyin myeloproliferatiivinen oireyhtymä (MPS, Philadelphia+), jonka keskimääräinen eloonjäämisaika oli 3 vuotta. Lukuun ottamatta pientä osaa potilaista, jotka eivät reagoi tai reagoi huonosti tyrosiinikinaasin estäjiin (TKI:t), eloonjäämistodennäköisyys on nyt hyvin lähellä yleisväestön todennäköisyyttä, kun potilaat ovat elinikäisessä TKI-hoidossa (leukeemiset kantasolut ovat alhaisia TKI:ille). Jotkut potilaat, joilla on hyvä vaste hoitoon, harkitsevat todennäköisesti hoidon lopettamista, mutta hieman yli 50 % heistä joutuu jatkamaan sitä. Niin monien potilaiden on otettava TKI-lääkkeitä koko elämänsä ajan, mikä aiheuttaa useita ongelmia:

1. - intoleranssi eri molekyylejä kohtaan kunkin myrkyllisyydestä riippuen,
2. - TKI-resistenssin kehittyminen, jolle on tunnusomaista BcrAbl1-fuusio-RNA:n prosenttiosuuden nousu hoidosta tai suuremmista annoksista huolimatta.

Näihin vastustuskykyihin on monia syitä, mukaan lukien ne, jotka tunnetaan mille tahansa molekyylille:

• farmakokineettiset syyt, jotka voidaan arvioida molekyylien plasmaannostuksella;
• Leukemiasoluihin liittyvät syyt: soluun siirtyminen sisäänvirtauspumpun (hOct1) ja ulosvirtauspumppujen (MDR1) välisestä antagonismista riippuen ja BcrAbl1-kohteeseen sitoutumisen epäonnistuminen (farmakodynamiikka), pääasiassa Abl1:n tyrosiinikinaasidomeenin mutaatiolla, poikkeuksellisesti Abl1-geenin monistaminen.

Nämä koskevat Phi+ akuutin lymfoblastisen leukemian (Phi+ALL) konsolidaatiovaihetta.

BcrAbl1:n tyrosiinikinaasidomeenin (TKD) mutaatiot aiheuttavat noin 25 - 30 % ensimmäisen linjan hoitoresistenssin syistä, mutta ne voivat saavuttaa 50 - 60 % resistenssistä toisen linjan hoidossa. Näiden mutaatioiden esiintyminen edellyttää muutosta molekyyli, jos mahdollista. Yli 100 TKD-mutaatiota on kuvattu. Näiden mutaatioiden kehitys/valinta vaikuttaa sekä ensimmäisen sukupolven TKI:ihin (imatinibi) että toisen sukupolven TKI:ihin (dasatinibi, nilotinibi ja bosutinibi). Kolmannen sukupolven TKI:ille (ponatinibille) on jopa ilmaantumassa resistenssimutaatioita. Sen vuoksi käytettävissä on herkkyysprofiileja, jotka auttavat valitsemaan oikeat molekyylit ensilinjan hoidon lisäksi.

Kaikista näistä mutaatioista jotkut ovat erityisen pelottavia, kuten T315I (vain herkkä ponatinibille) tai T315M tai L (resistentti kaikille molekyyleille, mukaan lukien ponatinibille). Nîmesin yliopistollinen sairaala on yksi seitsemästä keskuksesta vuoden 2005 STIC-ohjelmassa, joka on omistettu TDK-mutaatioiden etsimiseen. Vuonna 2018 olimme havainneet 93 erilaista mutaatiota 68 potilaalla, joilla oli resistenssimutaatioita, mukaan lukien 23 T315I-tapausta, matalaherkkyystekniikoilla (Sanger-sekvensointi).

Meillä on nyt paljon herkempi menetelmä, jossa käytetään seuraavan sukupolven sekvensointia yhdistettynä erittäin korkealaatuisiin polymeraasiketjureaktioihin, jotka tarjoavat uusia näkökulmia.

CD8+ T-solut ovat perinteisesti mukana kasvaimen hallinnassa. Tämä on johtanut lupaavaan uuteen lähestymistapaan kasvainten hoitoon: immunoterapia, joka kohdistuu inhiboiviin reseptoreihin tai "immuunitarkistuspisteisiin" (esimerkiksi CTLA4, PD1 tai sen ligandi PDL1). Nämä ovat negatiivisia palautereittejä, jotka muodostuvat pitkittyneen T-soluaktivaation jälkeen. Kun T-lymfosyyttejä stimuloidaan pitkiä aikoja, ne alkavat ilmentää tämän tyyppistä reseptoria pinnallaan. Nämä estävät reseptorit estävät T-solujen toimintaa ja lisääntymistä. Näihin reseptoreihin kohdistuvat vasta-aineet estävät tämän negatiivisen palautereitin, mikä lisää T-solujen aktiivisuutta. Koska kasvainantigeenejä vastaan ​​suunnatut lymfosyytit yli-ilmentävät näitä estäviä reseptoreita, niihin kohdistuvien vasta-aineiden antaminen voi tehostaa kasvainten vastaista immuuniaktiivisuutta ja joillakin potilailla indusoida kasvaimen regressiota.

Klassisesti T315I-tyypin mutaation esiintyminen liittyy kroonisen myelooisen leukemian etenemiseen liittyvään BcrAbl1:n räjähdysmäiseen lisääntymiseen. Tämä pätee myös muihin mutaatioihin, kuten E255K. Näin ollen meillä on muutamia "epätyypillisiä" T315I-tapauksia, joiden BcrAbl1-tasot ovat vähintään 1 % ja T315I:n prosenttiosuus on lähellä 100 % yli vuoden ajan tai potilas, jonka BcrAbl1-taso on noin 1 % yli vuoden ajan. 2 vuotta ja kuljettaa T315I:tä 5 %:lla.

Näyttää siis siltä, ​​että pelkkä tiettyjen mutaatioiden, kuten T315I, läsnäolo ei yksin selitä taudin etenemistä. Tämä räjähdysmäinen eteneminen saattaa liittyä toiseen (ainakin) leukemiasolulle spesifiseen tapahtumaan, kuten toisen geenin mutaatioon (ei vielä kuvattu), tai se voi liittyä leukemiasolun ympäristöön, kuten immuunijärjestelmän ohjaukseen.

Näiden TKI-resistenssimutaatioiden, erityisesti T315I:n, "epätyypillistä" kehitystä, joka on yhtä yleinen kuin pelottavaakin, voitaisiin hallita näillä synnynnäisillä CD8+ T-soluilla. Tämä selittäisi pitkiä ajanjaksoja (jopa yli 2 vuotta dokumentoitu) sellaisten kloonien läsnäolosta, jotka kantavat näitä mutaatioita ilman merkittävää sairauden etenemistä, paitsi, yksinomaan molekyylitasolla, BcrAbl1-taso lähellä 1 %.

Tämän projektin tavoitteena on testata, liittyvätkö alhaiset BcrAbl1-tasot resistenssimutaatioista huolimatta synnynnäisten CD8+ T-solujen korkeisiin tasoihin olettaen, että näillä soluilla on kasvainten vastainen rooli. Tämän tutkimuksen tarkoituksena on selvittää:

• Yhteys synnynnäisten CD8+ T-solujen määrän ja Phi+-patologioiden kehityksen välillä (krooninen myelooinen leukemia ja Philadelphia-kromosomipositiivinen akuutti lymfosyyttinen leukemia (Phi+ ALL), joissa on resistenssimutaatio ELN 2013:n ja PFi-LMC:n suositusten mukaisesti.
• Yhteys synnynnäisten CD8+-T-solujen tason ja TKI-resistenssikloonien laajenemisen välillä, arvioituna mutaation sisältävien BcrAbl1-kopioiden lukumääränä suhteessa Abl-kopioiden lukumäärään.