Tyroglobuliinin hoitopistemääritys metastaattisen erilaistuneen kilpirauhassyövän nopeaan havaitsemiseen

Menetelmät ja materiaalit

Hypoteesi: Uuden POC-Tg:n diagnostinen tarkkuus on verrattavissa nykyisiin diagnostisiin menetelmiin, joita käytetään DTC-etäpesäkkeiksi epäiltyjen kohdunkaulan LN:iden arvioimiseen.

Tavoite

1. POC-Tg:n validointi FNA-klinikalla: Määrittämättömät tai epäilyttävät kohdunkaulan LN:t potilailla, joilla on tunnettu tai epäilty DTC, arvioidaan käyttämällä sekä uutta POC-Tg:tä että muodollista arviointia (muodollinen immunomääritys Tg:lle ja sytologialle).
2. POC-Tg:n validointi OR:ssa: Epäselvät tai epäilyttävät kohdunkaulan LN:t potilailla, joille on leikattu DTC:n vuoksi, arvioidaan sekä uuden POC-Tg:n että muodollisen arvioinnin (jäädytetty leikkaus ja/tai lopullinen histologia patologisessa laitoksessa) avulla.

Merkitys: Tarkka POC-Tg voi muuttaa nykyisiä diagnostiikka- ja hoitomenetelmiä potilailla, joilla epäillään metastaattista DTC:tä, ja parantaa potilaan hoitoa.

Opintojen suunnittelu:

Tutkijat tekevät monikeskustutkimuksen. Sorokan yliopiston lääketieteellisen keskuksen (SUMC) kliininen tutkimuskeskus hallinnoi kaikkia koodattuja tietoja keskitetysti sähköisellä tapausraporttilomakkeella. Kaikki tiedot uuden POC-Tg:n herkkyys- ja spesifisyyden arvioimiseksi sekä DTC-kohdunkaulan LN-metastaasin nykyiset diagnostiset menetelmät analysoidaan takautuvasti vertailustandardia ("kulta") vastaan ​​(katso alla). Kliiniset päätökset tehdään DTC-etäpesäkkeiksi epäiltyjen kohdunkaulan LN:n arvioinnissa voimassa olevien ohjeiden ja hyväksyttyjen lähestymistapojen mukaisesti (FNA-klinikalla FNAC:n ja FNA-Tg:n yhdistelmä; ja OR:ssa pakasteosasto ja/tai lopullinen histologia).

Yksityiskohtainen tutkimuspöytäkirja

1. FNA-klinikan haara:

   Kaikille rekrytoiduille potilaille tehdään niskatutkimus US-skannerin avulla, jossa on 12,5 MHz:n lineaarinen vaiheistettu antennimuunnin. Kokenut lääkäri (endokrinologi, otolaryngologi tai radiologi) suorittaa USA:n ohjaaman FNA:n epäilyttävälle tai määrittelemättömälle LN:lle kliinisen aiheen mukaisesti. LN luokitellaan epäilyttäväksi, jos jokin seuraavista kuvantamisominaisuuksista ilmenee: kalkkeutuminen, kystinen muutos, hyper-ekogeenisuus tai perifeerinen tai diffuusi lisääntynyt vaskulaarisuus väri-Doppler-kuvauksessa. LN luokitellaan määrittelemättömäksi epäilyttäväksi, kun selkeitä hyvänlaatuisia tai epäilyttäviä kuvantamispiirteitä ei löydy (ei kaikuperäistä hilsettä tai hilarista verisuonia, jos epäilyttäviä löydöksiä ei ole). FNA-toimenpide suoritetaan USA:n ohjauksessa vapaan käden tekniikalla käyttäen 22-25 gaugen neulaa, joka on yhdistetty 3-10 ml:n ruiskuun, kuten jokaisessa lääkärikeskuksessa tehdään rutiininomaisesti. Jos teknisesti ja kliinisesti mahdollista, jokaisesta LN:stä otetaan näyte kahdesti: yksi jakso sytologiaa ja yksi FNA-Tg-huuhtelu.

   FNA sytologiaa varten (FNAC) – FNAC-näytteet valmistetaan suorista sivelysoluista ja/tai nestepohjaisesta sytologiasta, kuten jokaisessa lääketieteellisessä keskuksessa tehdään rutiininomaisesti. SUMC:n FNA-klinikalla näytteet levitetään objektilaseille ja kiinnitetään välittömästi 95-prosenttisessa etanolissa suoraan sivelymenetelmällä. Nestepohjaisella sytologiamenetelmällä näytteet valmistetaan käyttämällä ThinPrep PreservCyt® -laitetta (Hologic Ins., Marlborough, MA, USA). Sytologiset löydökset tulkitsevat kilpirauhasen sytologiaan erikoistuneet sytopatologit. Kiinnostavasta LN:stä saadut sytologiset tulokset luokitellaan: pahanlaatuinen, hyvänlaatuinen tai määrittelemätön.

   FNA-Tg ja POC-Tg - Kun neula on lokalisoitu kiinnostavan LN:n sisään, ruiskun kahva tuottaa alipainetta samalla kun se suorittaa sisään-ulospäin ja pyörivää liikettä, kunnes veristä materiaalia näkyy ruiskun proksimaalisessa päässä. neula. Sen jälkeen 100 µl 0,9 % (w/v) suolaliuosta vedetään neulan kautta ruiskuun, joka sisältää 100 µl lievästi veristä aspiraattia kiinnostavasta LN:stä. Aspiraatti siirretään sitten Eppendorf-putkeen saman neulan kautta, jota käytettiin FNA-menettelyssä. Tällä hetkellä POC-Tg-sarjan tuotepussi avataan. Kertakäyttöisellä pipetillä imetään 40 µl Eppendorf-putkesta ja tiputetaan POC-Tg-sarjan näytekaivon keskelle. Kaksi tippaa puskuria annostellaan sitten näytekaivon keskelle. POC-Tg:n tulokset saadaan ja dokumentoidaan 10 minuutin kuluttua. POC-Tg-sarjan tarkkuuden vertaamiseksi muodolliseen Tg-immunoanalyysiin, jota käytetään kussakin laitoksessa, 0,9-prosenttista suolaliuosta lisätään Eppendorf-putkeen jätettävään aspiraattiin 0,6 ml:n lopulliseen tilavuuteen ja siirretään sitten. geeliä sisältävään putkeen ja lähetetään kliiniseen laboratorioon, joka suorittaa Tg-mittauksen.

   Vertailustandardi ("kultainen") - LN diagnosoidaan lopulta metastaattiseksi, jos ne osoittavat pahanlaatuista FNA-sytologiaa (Bethesda 6) tai täyttävät vähintään yhden seuraavista kriteereistä: (i) pahanlaatuisuuden vahvistus kirurgiseen näytteeseen (histologia), ( ii) myöhempi toistuva FNA- tai ydinneulabiopsia, joka raportoi Bethesda 6:sta tai DTC:stä, tai (iii) seurantakuvauksella vuoden kuluttua, jossa havaitaan selkeitä etäpesäkkeiden US-piirteitä. LN, jolla on hyvänlaatuinen tai epämääräinen FNA-sytologia, joka ei sisällä metastaattista sairautta samoilla kriteereillä, diagnosoidaan lopulta hyvänlaatuiseksi.

   Rutiinilaboratorioarviointi – Analyytit, kuten plasman Tg, anti-Tg-vasta-aineet, anti-kilpirauhasperoksidaasi, TSH, vapaa T4 ja vapaa T3, suoritetaan osana rutiiniarviointia potilaille, joilla epäillään tai tiedetään kilpirauhassairautta.

   Vaaditut tiedot (kaappaavat tiedot):

   • Tekniset tiedot (keskusta kohden): Kussakin laitoksessa käytetty yhdysvaltalainen yritys, FNA-Tg-immunomäärityksen tyyppi (tyyppi, yritys, havaitsemisraja, raportoitu tarkkuus), käytetty sytologinen arviointi (tyyppi ja yritys).
   • Demografiset ja kliiniset tiedot: Syntymäaika, indeksitoimenpiteen päivämäärä, ikä (vuodet) indeksitoimenpiteen aikana, Hashimoto-tyreoidiitin aikaisempi diagnoosi (ICD9-koodi 2452), Graven taudin aiempi diagnoosi (ICD9-koodi 2420), hoidettu levotyroksiinilla tai kilpirauhaslääkkeellä, aiempi kilpirauhasleikkaus (ei, lobektomia [vasen/oikea], sub-total kilpirauhasen poisto, täydellinen kilpirauhasen poisto), aikaisempi kaulan dissektio (keskinen [ei, oikea, vasen], lateraalinen taso 2-4 [ei, oikea, vasen], sivutaso 5 [ei, oikea, vasen]).
   • Laboratoriotiedot ennen indeksimenettelyä (jokainen raportoidaan sen laboratorion yksiköillä, jossa se suoritettiin, ja normin X ylärajana): TSH, Tg, anti-Tg-vasta-aineet, vapaa T4, vapaa T3, anti- kilpirauhasen peroksidaasi.
   • Mitä tulee USA:n löydöksiin kilpirauhasesta, epäilyttävimmän kyhmyn osalta tarkastellaan seuraavia tietoja: TIRADS-pisteet, TIRADS-luokka, American Thyroid Association -luokka, kolme ulottuvuutta ja tilavuus.
   • Yhdysvalloista saadut löydökset LN:stä, josta toimenpide tehdään (kyllä/ei kullekin): kaikuinen hilum, hilar-verisuonten muodostuminen, kalkkeutuminen, kystinen muutos, hyperekogeenisuus, perifeerinen tai diffuusi lisääntynyt verisuonisuus väridopplerkuvauksessa, lopullinen tulkinta (epämääräinen/epäilyttävä) ).
   • Sytologinen raportti epäilyttävimmästä/oleellisimmasta kilpirauhasen kyhmystä: Bethesda-järjestelmän pisteet.
   • LN:n sytologiset löydökset, joista toimenpide tehdään: luokiteltu hyvänlaatuiseksi, epämääräiseksi tai pahanlaatuiseksi.
   • FNA-Tg- yksiköt laitoslaboratorion ilmoittamana ja X normin yläraja.
   • POC-Tg-positiivinen tai negatiivinen.
   • Lopullinen histologia
2. TAI-varsi:

Kilpirauhasen/niska-leikkaus ja ex-vivo FNA – Kaikki värvätyt potilaat leikataan kliinisen aiheen mukaisesti joko osana DTC:n ensisijaista hoitoa tai jatkuvaa tai toistuvaa DTC:tä. Kilpirauhasen ja kaulan leikkausleikkauksia johtavat kokeneet otolaryngologit tai endokriiniset kirurgit. Aina kun epämääräinen tai epäilyttävä LN löydetään ja katsotaan, että LN:n jäädytetty leikkausraportti saattaa muuttaa leikkauksen laajuutta, LN leikataan ja arvioidaan sekä muodollisella arviointi-jäädytetyllä leikeellä että POC-Tg:llä. LN:n dissektion jälkeen ex vivo FNA-Tg ja POC-Tg suoritetaan edellä kuvatulla tavalla ("FNA-Tg ja POC-Tg" -osiossa).

Pakastettu leike – Pakasteleikkeen asiaankuuluva näyte leikataan, käsitellään ja lähetetään patologiseen arviointiin kliinisen tarpeen mukaisesti ja rutiininomaisesti jokaisessa lääketieteellisessä keskuksessa. Kaikki kliiniset päätökset leikkauksen aikana tehdään jäädytettyjen leikkaustulosten tai kliinisen arvion mukaan. Kiinnostuksen kohteena olevasta LN:stä saadut pakasteleikkeen analyysin histologiset tulokset luokitellaan: pahanlaatuinen, hyvänlaatuinen tai määrittelemätön/epäselvä.

Vertailustandardi ('kultainen') LN diagnosoidaan lopulta hyvänlaatuiseksi tai pahanlaatuiseksi (DTC-metastaasi) lopullisen histologisen raportin mukaan.

Vaaditut tiedot:

• Tekniset tiedot (keskusta kohden): Pakastusleikkauslaitteisto, FNA-Tg-immunomäärityksen tyyppi (tyyppi, kiinteä, havaitsemisraja, raportoitu tarkkuus).
• Demografiset ja kliiniset tiedot: Syntymäaika, indeksitoimenpiteen päivämäärä, ikä (vuodet) indeksitoimenpiteen aikana, Hashimoto-tyreoidiitin aikaisempi diagnoosi (ICD9-koodi 2452), Graven taudin aiempi diagnoosi (ICD9-koodi 2420), hoidettu levotyroksiinilla tai kilpirauhaslääkkeellä, aiempi kilpirauhasleikkaus (ei, lobektomia [vasen/oikea], sub-total kilpirauhasen poisto, täydellinen kilpirauhasen poisto), aikaisempi kaulan dissektio (keskinen [ei, oikea, vasen], lateraalinen taso 2-4 [ei, oikea, vasen], sivutaso 5 [ei, oikea, vasen]).
• Laboratoriotiedot ennen indeksimenettelyä (jokainen raportoidaan sen laboratorion yksiköillä, jossa se suoritettiin, ja normin X ylärajana): TSH, Tg, anti-Tg-vasta-aineet, vapaa T4, vapaa T3, anti- kilpirauhasen peroksidaasi.
• Sytologinen raportti epäilyttävimmästä/oleellisimmasta kilpirauhasen kyhmystä: Bethesda-järjestelmä.
• Asianomaisen LN:n sytologiset löydökset: luokiteltu hyvänlaatuiseksi, epämääräiseksi tai pahanlaatuiseksi.
• Suunniteltu leikkaus: lobektomia [vasen/oikea], sub-total kilpirauhasen poisto, täydellinen kilpirauhasen poisto, kaulan dissektio (keskinen [ei, oikea, vasen], lateraalinen taso 2-4 [ei, oikea, vasen], lateraalinen taso 5 [ei, oikea vasen]).
• FNA-Tg- yksiköt laitoslaboratorion ilmoittamana ja X normin yläraja.
• POC-Tg-positiivinen tai negatiivinen.
• Jäädytetty osioraportti: pahanlaatuinen, hyvänlaatuinen tai määrittelemätön/epäselvä.
• Jäädytettyjen osien arviointiin tarvittava kokonaisaika - dissektiosta raporttiin (minuutteja).
• Suoritettu toiminto: suunnitelman mukaan/laajennettu (täsmennä).
• Lopullinen histologia

Tilastollinen analyysi:

Arviot herkkyydestä ja spesifisyydestä lasketaan vastaavasti positiivisille ja negatiivisille näytteille, kun taas niiden tila määritellään käyttämällä vertailustandardia ("kulta") (diagnostinen menettely sytologian ja histologian tuloksista sekä muista kliinisistä tiedoista riippuen). Tutkimuksen päätavoitteiden saavuttamiseksi 95 %:n luottamusväli muodostetaan kunkin validointiparametrin ympärille. Suunnitteluvaikutus otetaan huomioon OR:ssa otetuille näytteille, jotka ovat peräisin samalta potilaalta, käyttämällä keskivirheen sandwich-estimaattoria. Lisäksi tutkijat selvittävät mahdollisia tekijöitä, jotka liittyvät diagnostisen testin yhteyteen tai erimielisyyteen vertailustandardin ("kulta") kanssa. Erityisesti niiden potilaiden ominaisuuksia, joiden diagnoosi oli linjassa vertailustandardin ("kultaisen") kanssa, verrataan potilaisiin, joiden tulokset ovat ristiriidassa. Tämäntyyppinen analyysi osoittaa mahdolliset populaatiot, joille testiä ei pitäisi käyttää. Vertailut tehdään standardinmukaisella tilastomenetelmällä, ts. Chi-Square tai Fisher's Exact -testi kategorisille muuttujille ja t-testi, ANOVA tai ei-parametriset vaihtoehtoiset testit jatkuville parametreille. Luottamusvälit mukautetaan tarvittaessa klusteroituihin havaintoihin.