Thyroglobulin Point of Care Assay a metasztatikus differenciált pajzsmirigykarcinóma gyors kimutatására

Módszerek és anyagok

Hipotézis: Az új POC-Tg diagnosztikai pontossága összevethető lesz a DTC-metasztázisként gyanús nyaki LN-ek értékelésére használt jelenlegi diagnosztikai módszerekkel.

Cél

1. A POC-Tg validálása az FNA klinikán: Az ismert vagy gyanús DTC-vel rendelkező betegek bizonytalan vagy gyanús cervicalis LN-it mind az új POC-Tg, mind a formális értékelés (a Tg és citológiai formális immunoassay) segítségével értékeljük.
2. A POC-Tg validálása az OR-ben: A DTC miatt operált betegek bizonytalan vagy gyanús cervicalis LN-eit mind az új POC-Tg, mind a formális értékelés (fagyasztott metszet és/vagy végső szövettan a patológiás intézetben) segítségével értékelni kell.

Jelentősége: A pontos POC-Tg megváltoztathatja a metasztatikus DTC-gyanús betegek jelenlegi diagnosztikai és kezelési megközelítését, és javíthatja a betegek kezelését.

Dizájnt tanulni:

A nyomozók többközpontú vizsgálatot fognak végezni. Minden kódolt adatot központilag, elektronikus esetbejelentő űrlap segítségével kezel a Soroka Egyetemi Orvosi Központ (SUMC) Klinikai Kutatóközpontja. Az új POC-Tg szenzitivitásának és specificitásának értékeléséhez szükséges összes adatot, valamint a DTC cervicalis LN-metasztázis jelenlegi diagnosztikai módszereit retrospektív módon elemezzük a referencia („arany”) standardhoz képest (lásd alább). A klinikai döntéseket a jelenlegi irányelvek és elfogadott megközelítések szerint hozzák meg a DTC-metasztázisként gyanúsított cervicalis LN értékelésére (az FNA klinikán az FNAC és az FNA-Tg kombinációja; az OR-ban pedig a fagyasztott szakasz és/vagy végső szövettan).

Részletes vizsgálati jegyzőkönyv

1. Az FNA klinika részlege:

   Minden felvett páciens nyakát UH vizsgálatnak vetik alá egy 12,5 MHz-es lineáris fázissoros átalakítóval ellátott US-szkennerrel. A gyanús vagy határozatlan LN esetén az USA által irányított FNA-t egy tapasztalt orvos (endokrinológus, fül-orr-gégész vagy radiológus) végezheti el, a klinikai indikációknak megfelelően. Az LN gyanúsnak minősül, ha a következő képalkotó jellemzők bármelyike ​​jelen van: meszesedés, cisztás elváltozás, hiper-echogenitás vagy perifériás vagy diffúz megnövekedett vaszkuláris a színes Doppler képalkotáson. Az LN akkor minősül meghatározatlan gyanúsnak, ha sem egyértelmű jóindulatú, sem gyanús képalkotó jellemzők nem találhatók (gyanús lelet hiányában sem echogén hilum, sem hilar vascularitás). Az FNA-eljárást az Egyesült Államok irányítása alatt, szabadkezes technikával hajtják végre, egy 22-25 gauge-es tűvel, amely 3-10 ml-es fecskendőhöz van csatlakoztatva, ahogy azt minden egészségügyi központban rutinszerűen elvégzik. Ha technikailag és klinikailag lehetséges, minden LN-ből kétszer mintát vesznek: egy passzálást a citológiához és egy passzálást az FNA-Tg kimosásához.

   FNA citológiához (FNAC) – Az FNAC mintákat közvetlen kenetekből és/vagy folyadékalapú citológiából készítik, amint azt minden egészségügyi központban rutinszerűen elvégzik. A SUMC FNA-klinikájában a mintákat tárgylemezekre kenik, és azonnal fixálják 95%-os etanolban közvetlen kenet módszerrel. A folyadék alapú citológiai módszerrel a mintákat a ThinPrep PreservCyt® (Hologic Ins., Marlborough, MA, USA) segítségével készítjük el. A citológiai leleteket pajzsmirigy-citológiára szakosodott citopatológusok értelmezik. Az érdeklődésre számot tartó LN-ből kapott citológiai eredményeket a következő kategóriákba soroljuk: rosszindulatú, jóindulatú vagy határozatlan.

   FNA-Tg és POC-Tg- Miután a tűt a kívánt LN-ben lokalizálták, a fecskendő nyele negatív nyomást kelt, miközben befelé-kifelé és forgó mozgást végez, amíg véres anyag nem jelenik meg a fecskendő proximális végén. tű. Ezt követően 100 µl 0,9%-os (w/v) sóoldatot szívunk a tűn keresztül a fecskendőbe, amely 100 µl enyhén véres aspirátumot tartalmaz a kérdéses LN-ből. Az aspirátumot ezután egy Eppendorf-csőbe juttatják át ugyanazon a tűn keresztül, amelyet az FNA-eljáráshoz használtak. Ekkor a POC-Tg készlet termékzacskója felnyílik. Egy eldobható pipetta segítségével 40 µL-t szívunk ki az Eppendorf-csőből, és csepegtetünk a POC-Tg készlet mintaüregének közepébe. Ezután két csepp puffert kell adagolni a mintaüreg közepébe. A POC-Tg eredményeit 10 perc elteltével megkapjuk és dokumentáljuk. A POC-Tg kit pontosságának összehasonlításához az egyes intézményekben használt formális Tg immunoassay-vel, 0,9%-os sóoldatot adnak az Eppendorf-csőben hagyott aspirátumhoz 0,6 ml-es végső térfogatig, majd áthelyezik. gélt tartalmazó csőbe, és elküldjük a Tg mérést végző klinikai laboratóriumba.

   A referencia ("arany") standard-LN-t végül metasztatikusként diagnosztizálják, ha rosszindulatú FNA citológiát mutatnak (Bethesda 6), vagy megfelelnek az alábbi kritériumok legalább egyikének: (i) a malignitás megerősítése a műtéti mintán (szövettan), ( ii) ezt követően ismételt FNA- vagy mag-tű-biopszia, amely Bethesda 6-ról vagy DTC-ről számol be, vagy (iii) egy év elteltével képalkotó követés, amely egyértelmű metasztázis US-jellemzőket mutat. A jóindulatú vagy határozatlan FNS-citológiájú, metasztatikus betegségtől mentes LN-t végül jóindulatúként diagnosztizálják.

   Rutin laboratóriumi kiértékelés – Az analitokat, például plazma Tg-t, anti-Tg-antitesteket, pajzsmirigy-peroxidáz-ellenes antitesteket, TSH-t, szabad T4-et és szabad T3-at, a pajzsmirigy-betegség gyanújával vagy ismertté válásával rendelkező betegek rutinvizsgálatának részeként kell elvégezni.

   Szükséges adatok (rögzítendő adatok):

   • Technikai adatok (központonként): Az egyes intézményekben használt egyesült államokbeli cég, az FNA-Tg immunoassay típusa (típus, cég, kimutatási határ, jelentett pontosság), használt citológiai értékelés (típus és cég).
   • Demográfiai és klinikai adatok: Születési idő, indexeljárás dátuma, életkor (év) az indexeljárás időpontjában, Hashimoto thyreoiditis múltbeli diagnózisa (ICD9 kód 2452), Grave-kór múltbeli diagnózisa (ICD9 kód 2420), kezelt levotiroxinnal vagy pajzsmirigy-ellenes gyógyszerrel, korábbi pajzsmirigyműtét (nem, lobectomia [bal/jobb], sub-total thyreoidectomia, teljes pajzsmirigyeltávolítás), korábbi nyakdisszekció (centrális [nem, jobb, bal], laterális szint 2-4 [nem, jobb, bal], oldalsó szint 5 [nem, jobb, bal]).
   • Laboratóriumi adatok az indexeljárás előtt (mindegyik az elvégzett laboratórium által használt mértékegységekkel és a norma X felső határértékével kerül jelentésre): TSH, Tg, anti-Tg- antitestek, szabad T4, szabad T3, anti- pajzsmirigy peroxidáz.
   • A pajzsmirigy USA-beli leleteivel kapcsolatban a következő információk érhetők el a leggyanúsabb csomókra vonatkozóan: TIRADS-pontok, TIRADS-osztály, American Thyroid Association osztály, három dimenzió és térfogat.
   • Az LN US-leletei, amelyekből az eljárást elvégezték (mindegyikre igen/nem): echogén hilum, hilus vascularitás, meszesedés, cisztás elváltozás, hiper-echogenitás, perifériás vagy diffúz megnövekedett vascularitás színes Doppler képalkotáson, végső értelmezés (határozatlan/gyanús) ).
   • A leggyanúsabb/legrelevánsabb pajzsmirigycsomó citológiai jelentése: Bethesda rendszerpontszám.
   • Az LN citológiai leletei, amelyekből az eljárást elvégzik: jóindulatú, határozatlan vagy rosszindulatú.
   • FNA-Tg- egységek az intézeti labor jelentése szerint, és X felső normahatár.
   • POC-Tg- pozitív vagy negatív.
   • Végső szövettan
2. A VAGY kar:

Pajzsmirigy-/nyakműtét és ex-vivo FNA – Minden felvett beteget a klinikai indikációknak megfelelően műteni kell, akár a DTC elsődleges kezelésének, akár a tartós vagy visszatérő DTC-nek a részeként. A pajzsmirigy- és nyaki disszekciós műtéteket tapasztalt fül-orr-gégész vagy endokrin sebészek vezetik. Amikor egy határozatlan vagy gyanús LN-t találnak, és úgy ítélik meg, hogy az LN lefagyott metszetjelentése megváltoztathatja a műtét mértékét, az LN-t feldarabolják, és mind a formális értékelés-fagyasztott metszet, mind a POC-Tg értékeli. Az LN boncolását követően az ex vivo FNA-Tg-t és POC-Tg-t a fent részletezettek szerint végezzük (az „FNA-Tg és POC-Tg” szakaszban).

Fagyasztott metszet – A fagyasztott metszethez tartozó mintát kiboncolják, kezelik, majd patológiai kivizsgálásra küldik, ahogyan klinikailag indokolt, és rutinszerűen elvégzik az egyes egészségügyi központokban. A műtét során minden klinikai döntés a fagyasztott metszet eredményeinek vagy a klinikai megítélésnek megfelelően történik. A fagyasztott metszet elemzésének szövettani eredményei, amelyeket a kérdéses LN-ből nyernek, a következő kategóriába sorolhatók: rosszindulatú, jóindulatú vagy határozatlan/nem meggyőző.

Referencia ('arany') Standard-LN végül jóindulatúként vagy rosszindulatúként (DTC metasztázis) kerül diagnosztizálásra a végső szövettani jelentés szerint.

Szükséges adatok:

• Műszaki adatok (központonként): Fagyasztott metszet berendezés, FNA-Tg immunoassay típusa (típus, cég, kimutatási határ, jelentett pontosság).
• Demográfiai és klinikai adatok: Születési idő, indexeljárás dátuma, életkor (év) az indexeljárás időpontjában, Hashimoto thyreoiditis múltbeli diagnózisa (ICD9 kód 2452), Grave-kór múltbeli diagnózisa (ICD9 kód 2420), kezelt levotiroxinnal vagy pajzsmirigy-ellenes gyógyszerrel, korábbi pajzsmirigyműtét (nem, lobectomia [bal/jobb], sub-total thyreoidectomia, teljes pajzsmirigyeltávolítás), korábbi nyakdisszekció (centrális [nem, jobb, bal], laterális szint 2-4 [nem, jobb, bal], oldalsó szint 5 [nem, jobb, bal]).
• Laboratóriumi adatok az indexeljárás előtt (mindegyik az elvégzett laboratórium által használt mértékegységekkel és a norma X felső határértékével kerül jelentésre): TSH, Tg, anti-Tg- antitestek, szabad T4, szabad T3, anti- pajzsmirigy peroxidáz.
• A leggyanúsabb/legrelevánsabb pajzsmirigycsomó citológiai jelentése: Bethesda rendszer.
• A releváns LN citológiai leletei: jóindulatúnak, határozatlannak vagy rosszindulatúnak minősítve.
• A tervezett műtét: lobectomia [bal/jobb], sub-total thyreoidectomia, teljes pajzsmirigyeltávolítás, nyaki disszekció (centrális [nem, jobb, bal], laterális szint 2-4 [nem, jobb, bal], laterális szint 5 [nem, jobb bal]).
• FNA-Tg- egységek az intézeti labor jelentése szerint, és X felső normahatár.
• POC-Tg- pozitív vagy negatív.
• A fagyasztott szakasz jelentése: rosszindulatú, jóindulatú vagy határozatlan/nem meggyőző.
• A fagyasztott metszet értékeléséhez szükséges összesített idő – a boncolgatástól a jelentésig (perc).
• A végrehajtott művelet: a tervezett/kibővített (adja meg).
• Végső szövettan

Statisztikai analízis:

A szenzitivitásra és specificitásra vonatkozó becsléseket a pozitív és negatív mintákra számítják ki, míg státuszukat a referencia ("arany") standard (a citológiai és szövettani eredményektől, valamint egyéb klinikai információktól függő diagnosztikai eljárás) segítségével határozzák meg. A vizsgálat fő céljainak elérése érdekében a 95%-os konfidenciaintervallumot az egyes validációs paraméterek köré építik fel. A tervezési hatást figyelembe veszik az OR-ben vett minták esetében, amelyek ugyanattól a pácienstől származnak, a standard hiba szendvicsbecslőjét használva. Ezenkívül a kutatók feltárják azokat a lehetséges tényezőket, amelyek a diagnosztikai tesztnek a referencia ("arany") standarddal való megegyezéséhez vagy ellentmondásához kapcsolódnak. Pontosabban, azoknak a betegeknek a jellemzőit, akiknél a diagnózist a referencia ("arany") standardhoz igazították, összehasonlítják az eltérő eredményekkel rendelkező betegek jellemzőivel. Az ilyen típusú elemzés olyan populációkat jelez, amelyek esetében a tesztet nem szabad felhasználni. Az összehasonlításokat szabványos statisztikai módszertannal végezzük, pl. Khi-négyzet vagy Fisher-féle egzakt teszt kategorikus változókhoz és t-próba, ANOVA vagy nem-paraméteres alternatív tesztek folytonos paraméterekhez. A megbízhatósági intervallumokat szükség szerint a csoportosított megfigyelésekhez kell igazítani.