Анализ тиреоглобулина в месте оказания медицинской помощи для быстрого обнаружения метастатического дифференцированного рака щитовидной железы

Методы и материалы

Гипотеза: диагностическая точность нового POC-Tg будет сравнима с современными диагностическими методами, используемыми для оценки шейных лимфоузлов, подозреваемых как метастазы ДРЩЖ.

Цель

1. Для проверки POC-Tg в клинике FNA: Неопределенные или подозрительные шейные лимфатические узлы у пациентов с известным или подозреваемым DTC будут оцениваться с использованием как нового POC-Tg, так и формальной оценки (формальный иммуноанализ на Tg и цитологию).
2. Для проверки POC-Tg в операционной: Неопределенные или подозрительные шейные лимфатические узлы у пациентов, оперированных по поводу DTC, будут оцениваться с использованием как нового POC-Tg, так и формальной оценки (замороженный срез и/или окончательная гистология в патологоанатомическом учреждении).

Значимость. Точный POC-Tg может изменить существующие подходы к диагностике и лечению пациентов с подозрением на метастатический ДРЩЖ и улучшить тактику ведения пациентов.

Дизайн исследования:

Исследователи проведут многоцентровое исследование. Все закодированные данные будут управляться централизованно, с использованием электронной формы истории болезни, Центром клинических исследований Медицинского центра Университета Сороки (SUMC). Все данные по оценке чувствительности и специфичности нового POC-Tg, а также современные методы диагностики метастазов шейного лимфоузла DTC будут проанализированы ретроспективно в сравнении с эталонным («золотым») стандартом (см. ниже). Клинические решения будут приниматься в соответствии с текущими рекомендациями и принятыми подходами для оценки ВН шейки матки, которые подозреваются как метастазы ДРЩЖ (в клинике FNA — комбинация FNAC и FNA-Tg, а в операционной — замороженные срезы и/или окончательная гистология).

Подробный протокол исследования

1. Отделение клиники FNA:

   Все набранные пациенты будут проходить ультразвуковое исследование шеи с использованием ультразвукового сканера с линейным преобразователем с фазированной решеткой 12,5 МГц. FNA под контролем УЗИ подозрительного или неопределенного ВН будет выполняться опытным врачом (эндокринологом, отоларингологом или рентгенологом) в соответствии с клиническими показаниями. ВН будет классифицирован как подозрительный, если присутствует какой-либо из следующих признаков визуализации: кальцификация, кистозные изменения, гиперэхогенность или периферическое или диффузное усиление васкуляризации при цветной допплеровской визуализации. ВН будет классифицироваться как неопределенный подозрительный, если не будет обнаружено ни явных доброкачественных, ни подозрительных визуализационных признаков (ни эхогенных ворот, ни васкуляризации ворот при отсутствии подозрительных признаков). Процедура FNA будет проводиться под руководством США с использованием техники свободной руки с использованием иглы калибра 22–25, соединенной со шприцем объемом 3–10 мл, как это обычно делается в каждом медицинском центре. Если это технически и клинически возможно, каждый ЛУ будет браться дважды: один пассаж для цитологии и один пассаж для вымывания FNA-Tg.

   FNA для цитологии (FNAC). Образцы FNAC будут приготовлены из прямых мазков и/или жидкостной цитологии, как это обычно делается в каждом медицинском центре. В клинике FNA в SUMC образцы будут намазаны на предметные стекла и немедленно зафиксированы в 95% этаноле с использованием метода прямого мазка. При использовании метода жидкостной цитологии образцы будут подготовлены с использованием ThinPrep PreservCyt® (Hologic Ins., Мальборо, Массачусетс, США). Результаты цитологии будут интерпретированы цитопатологами, специализирующимися на цитологии щитовидной железы. Результаты цитологии, полученные из интересующего ЛУ, будут классифицированы как злокачественные, доброкачественные или неопределенные.

   FNA-Tg и POC-Tg- После того, как игла будет локализована внутри интересующего ЛУ, ручка шприца будет создавать отрицательное давление, выполняя движения внутрь-наружу и вращательные движения до тех пор, пока в проксимальном конце иглы не появится кровянистый материал. игла. После этого через иглу в шприц будет набрано 100 мкл 0,9% (вес/объем) физиологического раствора, который будет содержать 100 мкл аспирата со слабой кровью из интересующего ЛУ. Затем аспират будет перенесен в пробирку Эппендорфа через ту же иглу, которая использовалась для процедуры FNA. В это время пакет с продуктом набора POC-Tg будет открыт. С помощью одноразовой пипетки аспирируют 40 мкл из пробирки Эппендорфа и капают в середину лунки для образца набора POC-Tg. Затем две капли буфера вносятся в середину лунки для образца. Результаты POC-Tg будут получены и задокументированы через 10 минут. Чтобы сравнить точность набора POC-Tg с формальным иммуноанализом на Tg, который используется в каждом учреждении, 0,9% физиологический раствор будет добавлен к аспирату, который будет оставлен в пробирке Эппендорфа, до конечного объема 0,6 мл, а затем перенесен. в пробирку с гелем и отправить в клиническую лабораторию, которая проводит измерение Tg.

   Эталонный («золотой») стандарт-ВН будет окончательно диагностирован как метастатический, если они показывают злокачественную FNA по цитологическому анализу (Bethesda 6) или отвечают хотя бы одному из следующих критериев: (i) подтверждение злокачественности на основании операционного образца (гистология), ( ii) последующая повторная биопсия FNA или пункционная биопсия, сообщающая о Bethesda 6 или DTC, соответственно, или (iii) последующее наблюдение с визуализацией через год, показывающее четкие УЗ-признаки метастазирования. ВН с доброкачественной или неопределенной цитологией FNA без метастатического заболевания по тем же критериям будет окончательно диагностирован как доброкачественный.

   Рутинная лабораторная оценка. Аналиты, такие как ТГ плазмы, анти-ТГ-антитела, антитиреоидная пероксидаза, ТТГ, свободный Т4 и свободный Т3, будут выполняться как часть обычной оценки пациентов с подозрением или известным заболеванием щитовидной железы.

   Необходимые данные (данные для сбора):

   • Технические данные (на центр): фирма США, используемая в каждом учреждении, тип иммуноанализа FNA-Tg (тип, фирма, предел обнаружения, зарегистрированная точность), используемая цитологическая оценка (тип и фирма).
   • Демографические и клинические данные: дата рождения, дата индексной процедуры, возраст (в годах) на момент индексной процедуры, предыдущий диагноз тиреоидита Хашимото (код 2452 по МКБ-9), предыдущий диагноз болезни Грейвса (код по МКБ 9 2420), лечение с левотироксином или антитиреоидным препаратом, предшествующая операция на щитовидной железе (нет, лобэктомия [левая/правая], субтотальная тиреоидэктомия, полная тиреоидэктомия), предшествовавшая диссекция шеи (центральная [нет, правая, левая], латеральный уровень 2-4 [нет, справа, слева], боковой уровень 5 [нет, справа, слева]).
   • Лабораторные данные до индексной процедуры (каждый будет представлен в единицах, используемых лабораторией, в которой она проводилась, и в виде Х верхней границы нормы): ТТГ, Тг, анти-Тг-антитела, свободный Т4, свободный Т3, анти- тиреоидная пероксидаза.
   • Что касается результатов УЗИ щитовидной железы, для наиболее подозрительного узла будет доступна следующая информация: точки TIRADS, класс TIRADS, класс Американской ассоциации щитовидной железы, три измерения и объем.
   • Результаты УЗИ ЛУ, из которого выполняется процедура (да/нет для каждого): эхогенность ворот, васкуляризация ворот, кальцификация, кистозные изменения, гиперэхогенность, периферическая или диффузная повышенная васкуляризация при цветной допплеровской визуализации, окончательная интерпретация (неопределенная/подозрительная ).
   • Цитологический отчет о наиболее подозрительном/соответствующем узле щитовидной железы: оценка по системе Bethesda.
   • Цитологические данные ЛУ, из которого проводится процедура: классифицируются как доброкачественные, неопределенные или злокачественные.
   • FNA-Tg-единицы по данным лаборатории учреждения и X верхняя граница нормы.
   • POC-Tg- положительный или отрицательный.
   • Окончательная гистология
2. Операционная рука:

Хирургия щитовидной железы/шеи и FNA Ex-vivo. Все набранные пациенты будут прооперированы по клиническим показаниям либо в рамках первичного лечения ДРЩЖ, либо при стойком или рецидивирующем ДРЩЖ. Операции по диссекции щитовидной железы и шеи будут проводиться опытными отоларингологами или эндокринологами. Всякий раз, когда обнаруживается неопределенный или подозрительный ЛУ, и считается, что отчет о замороженном срезе ЛУ может изменить объем операции, ЛУ будет препарирован и оценен как с помощью формальной оценки замороженного среза, так и с помощью POC-Tg. После вскрытия LN ex-vivo FNA-Tg и POC-Tg будут проводиться, как описано выше (в разделе «FNA-Tg и POC-Tg»).

Замороженный срез. Соответствующий образец для замороженного среза будет препарирован, обработан и отправлен на патоморфологическую оценку в соответствии с клиническими показаниями и обычно проводится в каждом медицинском центре. Все клинические решения во время операции будут приниматься в соответствии с результатами замороженных срезов или клинической оценкой. Результаты гистологии анализа замороженных срезов, полученные из интересующего ЛУ, будут классифицированы как злокачественные, доброкачественные или неопределенные/неубедительные.

Эталонный («золотой») стандарт — ВН будет окончательно диагностирован как доброкачественный или злокачественный (метастаз ДТК) в соответствии с окончательным гистологическим отчетом.

Необходимые данные:

• Технические данные (на центр): Оборудование для замороженных срезов, тип иммуноанализа FNA-Tg (тип, фирма, предел обнаружения, заявленная точность).
• Демографические и клинические данные: дата рождения, дата индексной процедуры, возраст (в годах) на момент индексной процедуры, предыдущий диагноз тиреоидита Хашимото (код 2452 по МКБ-9), предыдущий диагноз болезни Грейвса (код по МКБ 9 2420), лечение с левотироксином или антитиреоидным препаратом, предшествующая операция на щитовидной железе (нет, лобэктомия [левая/правая], субтотальная тиреоидэктомия, полная тиреоидэктомия), предшествовавшая диссекция шеи (центральная [нет, правая, левая], латеральный уровень 2-4 [нет, справа, слева], боковой уровень 5 [нет, справа, слева]).
• Лабораторные данные до индексной процедуры (каждый будет представлен в единицах, используемых лабораторией, в которой она проводилась, и в виде Х верхней границы нормы): ТТГ, Тг, анти-Тг-антитела, свободный Т4, свободный Т3, анти- тиреоидная пероксидаза.
• Цитологический отчет о наиболее подозрительном/релевантном узле щитовидной железы: система Bethesda.
• Цитологические данные соответствующего ЛУ: классифицируются как доброкачественные, неопределенные или злокачественные.
• Планируемая операция: лобэктомия [слева/справа], субтотальная тиреоидэктомия, полная тиреоидэктомия, диссекция шеи (центральная [нет, справа, слева], латеральный уровень 2-4 [нет, справа, слева], латеральный уровень 5[нет, правый левый]).
• FNA-Tg-единицы по данным лаборатории учреждения и X верхняя граница нормы.
• POC-Tg- положительный или отрицательный.
• Отчет о замороженном участке: злокачественный, доброкачественный или неопределенный/неубедительный.
• Общее время, необходимое для оценки замороженного среза - от вскрытия до отчета (минуты).
• Операция, которая была выполнена: в плановом/ расширенном виде (указать).
• Окончательная гистология

Статистический анализ:

Оценки чувствительности и специфичности будут рассчитываться для положительных и отрицательных образцов соответственно, а их статус будет определяться с использованием эталонного («золотого») стандарта (диагностическая процедура зависит от результатов цитологии и гистологии и другой клинической информации). Для достижения основных целей исследования вокруг каждого из параметров проверки будет построен 95% доверительный интервал. Эффект дизайна будет учитываться для образцов, взятых в операционной и взятых у одного и того же пациента, с использованием сэндвич-оценки стандартной ошибки. Кроме того, исследователи изучат потенциальные факторы, связанные с соответствием и несоответствием диагностического теста эталонному («золотому») стандарту. В частности, характеристики пациентов, у которых диагноз соответствовал эталонному («золотому») стандарту, будут сравниваться с теми, у кого результаты не согласуются. Этот тип анализа укажет на популяции, если таковые имеются, для которых не следует использовать тест. Сравнения будут проводиться с использованием стандартной статистической методологии, т.е. Хи-квадрат или точный критерий Фишера для категориальных переменных и t-критерий, ANOVA или непараметрические альтернативные тесты для непрерывных параметров. Доверительные интервалы будут соответствующим образом скорректированы для сгруппированных наблюдений.